[發(fā)明專利]一種核酸檢測方法及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111444791.3
• 申請日: 2021-11-30
• 公開（公告）號(hào): CN114317691A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 斯志娟;雷震
• 申請（專利權(quán)）人: 南昌市第九醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/6851
• 分類號(hào): C12Q1/6851;C12Q1/70;C12R1/93
• 代理公司: 北京清亦華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11201
• 代理人: 何世磊

1.一種核酸檢測方法，其特征在于，包括：

在Rt-PCR核酸檢測時(shí)，采用多管同測的批分析法增加實(shí)際進(jìn)入擴(kuò)增體系的樣本量。

2.權(quán)利要求1所述的核酸檢測方法的應(yīng)用，其特征在于，所述核酸檢測方用于新型冠狀病毒(2019-nCoV)核酸的檢測。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的核酸檢測方法的應(yīng)用，其特征在于，新型冠狀病毒(2019-nCoV)核酸的檢測包括以下步驟：

用細(xì)胞保存液將新型冠狀病毒全基因組假病毒質(zhì)控品稀釋為1：10、1：100、1：1000梯度濃度樣本，用新型冠狀病毒(2019-nCoV)核酸檢測試劑檢測上述梯度濃度樣本，各平行檢測三管；然后選擇三管均陽性的最低濃度(1：10)樣本再次倍比稀釋，形成系列梯度濃度樣本盤S1(1：10)、S2(1：20)、S3(1：40)、S4(1：80)、S5(1：160)、S6(1：320)、S7(1：640)；

用新型冠狀病毒(2019-nCoV)核酸檢測試劑檢測梯度濃度樣本盤S1-S7，每批各濃度平行檢測6管，共檢測6批次，最終每個(gè)濃度得到6個(gè)批分析結(jié)果，36個(gè)單管檢測結(jié)果，其中，單靶標(biāo)基因陽性管數(shù)≥1的批次判斷為該靶標(biāo)基因該批次陽性。

4.權(quán)利要求1所述的核酸檢測方法的應(yīng)用，其特征在于，所述核酸檢測方用于乙型肝炎病毒核酸的檢測。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的核酸檢測方法的應(yīng)用，其特征在于，乙型肝炎病毒核酸的檢測包括以下步驟：

取血清用細(xì)胞保存液稀釋成1：10、1：100、1:1000、1：10000的梯度濃度樣本，用乙型肝炎病毒核酸熒光定量PCR檢測試劑擴(kuò)增檢測上述梯度濃度樣本，各平行檢測3管；

取三管均陽性的最低濃度(1：100)樣本，再用細(xì)胞保存液稀釋成1：100、1：200、1:400、1：800、1：1600、1：3200、1：6400、1：12800、1：25600的梯度濃度樣本，然后用乙型肝炎病毒核酸熒光定量PCR檢測試劑擴(kuò)增檢測該梯度濃度樣本，各平行檢測10管，選擇全部陽性的最低濃度樣本(1：200)再次倍比稀釋，形成梯度樣本盤S1(1：200)、S2(1：400)、S3(1：800)、S4(1：1600)、S5(1：3200)、S6(1：6400)、S7(1：12800)；

用乙型肝炎病毒核酸熒光定量PCR檢測試劑檢測上述梯度濃度樣本盤S1-S7，每批各樣本平行測10管，每天檢測4-6批，共計(jì)檢測20批次，其中，批分析中至少有一管陽性則該批分析陽性，批分析中無陽性管則該批分析陰性。