[發明專利]一種利用KASP分子標記鑒定茄子顯性單性結實基因的引物對及其應用

在審

• 申請號: 202111442902.7
• 申請日: 2021-11-30
• 公開（公告）號: CN113943731A
• 公開（公告）日: 2022-01-18
• 發明（設計）人: 劉富中;舒金帥;張映;李淑培;陳鈺輝;楊錦坤
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蔬菜花卉研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6895;C12Q1/686
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 王艷齋

1.一種利用KASP分子標記鑒定茄子顯性單性結實基因的引物對，其特征在于，所述利用KASP分子標記鑒定茄子顯性單性結實基因的引物對包括2條正向特異性引物和1條反向通用引物；

所述正向特異性引物帶有FAM接頭或HEX接頭；

帶有FAM接頭的正向特異性引物的序列包括SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；

帶有HEX接頭的正向特異性引物的序列包括SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；

所述反向通用引物的序列包括SEQ ID No.3所示的核苷酸序列。

2.一種與茄子顯性單性結實基因連鎖的KASP分子標記，其特征在于，所述與茄子顯性單性結實基因連鎖的KASP分子標記位于茄子第6號染色體，物理位置為79.080～89.670Mb，其變異類型為A/G變異；

所述與茄子顯性單性結實基因連鎖的KASP分子標記的擴增引物為權利要求1所述的利用KASP分子標記鑒定茄子顯性單性結實基因的引物對。

3.一種鑒定茄子顯性單性結實基因的試劑盒，其特征在于，所述鑒定茄子顯性單性結實基因的試劑盒包括權利要求1所述的利用KASP分子標記鑒定茄子顯性單性結實基因的引物對；

優選地，所述利用KASP分子標記鑒定茄子顯性單性結實基因的引物對的濃度為5～15μM；

優選地，所述利用KASP分子標記鑒定茄子顯性單性結實基因的引物對混合制成PrimerMix；

優選地，所述Primer Mix中，所述帶有FAM接頭的正向特異性引物、帶有HEX接頭的正向特異性引物和反向通用引物的體積比為1:1:(2～3)，優選為1:1:2.5。

4.根據權利要求3所述的鑒定茄子顯性單性結實基因的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括Master Mix；

優選地，所述試劑盒還包括標準陽性模板；

優選地，所述試劑盒還包括水。

5.一種鑒定茄子顯性單性結實基因的方法，其特征在于，所述方法包括：

使用權利要求1所述的利用KASP分子標記鑒定茄子顯性單性結實基因的引物對和/或權利要求3或4所述的鑒定茄子顯性單性結實基因的試劑盒，對待測模板進行PCR擴增，再進行分析。

6.根據權利要求5所述的鑒定茄子顯性單性結實基因的方法，其特征在于，所述PCR擴增前還包括提取待測模板的步驟；

優選地，所述待測模板包括待測茄子植株的基因組DNA。

7.根據權利要求5或6所述的鑒定茄子顯性單性結實基因的方法，其特征在于，所述PCR擴增包括touch down擴增；

優選地，所述擴增的程序包括：

預變性：

90～95℃，12～18min；

循環擴增：

90～95℃，15～30s；61～55℃，55～65s，期間每個循環溫度降低0.5～0.6℃，循環10～12次；

90～95℃，15～30s；54～56℃，55～65s，循環25～28次。

8.根據權利要求5～7任一項所述的鑒定茄子顯性單性結實基因的方法，其特征在于，所述分析的步驟包括：

檢測PCR反應產物的熒光信號，判斷基因分型情況。