[發明專利]一種蛋白質穩定劑及其制備方法

在審

• 申請號: 202111436337.3
• 申請日: 2021-11-29
• 公開（公告）號: CN114031667A
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發明（設計）人: 高俊順;高俊莉;高金波;王洪
• 申請（專利權）人: 杭州廣科安德生物科技有限公司
• 主分類號: C07K1/00
• 分類號: C07K1/00
• 代理公司: 北京知果之信知識產權代理有限公司 11541
• 代理人: 高科

本發明公開了一種蛋白質穩定劑及其制備方法，包括下述原料：高分子量透明質酸，中分子量透明質酸，低分子量透明質酸，寡聚透明質酸，乙酰化透明質酸，聚丙烯酸鈉，乙二胺四乙酸二鈉二水合物，苯甲基磺酰氟，氯化鎂，聚乙二醇甲醚，氯化鈉或氯化鉀，ProClin 950，ProClin 300，牛血清白蛋白，膠原蛋白，二丙二醇或丙三醇，磷酸鹽或Tris?HCl緩沖溶液。本發明的有益效果為：本發明使用大小分子透明質酸和明膠等復配技術，加上高分子，防腐劑等協同作用，可大大延長各種蛋白的保質期和穩定性，也包括蛋白在各種表面或溶液中的，如聚苯乙烯板，乳膠珠，磁性顆粒和硝酸纖維素膜等，這些穩定劑還通過消除樣品基質和其他測定成分的非特異性結合降低本底。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種蛋白質穩定劑及其制備方法。

背景技術

蛋白質是一種具有復雜的空間立體結構的大分子物質，易受外界條件的影響發生變性。蛋白質穩定性與組成中的氨基酸種類有關系，例如含有巰基的氨基酸，最常見的是半胱氨酸，會降低蛋白質的穩定性，尤其在某些金屬離子，Cu²⁺、Zn²⁺等存在時，蛋白質對空氣中的氧更為敏感，而易發生不可逆變性。蛋白質活性的保存已經成為生物技術領域的重大難題。目前，蛋白質的長期保存一般用真空冷凍干燥方法保存，該保存方法的優點是，活性保存效果理想，保存時間長，但是存在缺點是操作繁瑣，需要特殊的儀器，成本高，需要水做復溶劑等，蛋白質以凍干形式和溶液形式使用和存儲。如果在制備，儲存和處理的關鍵階段未使用適當的穩定條件，則干燥和冷凍過程可能導致蛋白質變性。

在臨床檢測、生命科學研究中，蛋白質檢測試劑不僅要有一定的敏感度和特異性，其重復性和穩定性也是非常重要的。良好的穩定性，是其數據可靠性的一個重要標志。但是，一些酶類及蛋白標記物質，其穩定性是非常差的，在一般條件下極易降解或變性，導致檢測試劑的整體失效。如在化學發光免疫分析(CLIA)中，酶結合物經稀釋后很容易喪失活性，而酶活性的降低或喪失，都直接影響檢測結果的準確性。因此，如何保持蛋白質尤其是酶的活性的穩定是蛋白質檢測中的關鍵技術。又如胃泌素17(Gastrin 17，G-17)是小分子多肽，在離體血液中很不穩定，采血之后就開始快速降解，理論上在2-8℃保存時間只有3h，要開發胃泌素17檢測試劑盒，如何保證G-17的穩定是一個難點。

近年來，人們發現了一些有助于提高蛋白質溶液穩定性的物質，目前常見的用來增加蛋白質穩定性的方法：1.選擇各種添加劑，例如甘油，山梨醇，海藻糖。2.使用市場上可售的穩定劑成品：比如高甲氧基果膠和丙二醇藻酸鹽組成用于穩定酸性水成液如汁液中蛋白質懸浮體的蛋白質穩定劑。但他們都有著很明顯的局限性：要么保持蛋白質穩定性的能力不夠，要么跟后續的實驗體系產生沖突；所以應用性十分有限。可以在一定程度上保持蛋白質的活性，但是效果仍然不理想。

一般認為蛋白質的結構和環境條件決定了蛋白質的穩定性。外部因素，如溫度、pH值和鹽、金屬離子或其他污染物的存在可能使蛋白質變性。當蛋白質被吸附到實驗容器的一側時，也會變性。蛋白質必須在穩定其天然結構的環境中儲存和使用。

發明內容

本申請的主要目的在于提供一種成本低廉，能長時間保護蛋白活性的蛋白質穩定劑及其制備方法。

為了實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種蛋白質穩定劑，包括下述重量份的原料：高分子量透明質酸0.2-2份，中分子量透明質酸0.1-3份，低分子量透明質酸0.1-3份，寡聚透明質酸0.1-5份，乙酰化透明質酸0.05-2份，聚丙烯酸鈉0.1-3份，乙二胺四乙酸二鈉二水合物0.01-1份，苯甲基磺酰氟0.005-2份，氯化鎂0.05-2份，聚乙二醇甲醚0.01-2份，氯化鈉或氯化鉀0.05-2份，ProClin950 0.01-0.9份，ProClin 300 0.01-0.9份，牛血清白蛋白0.1-6份，膠原蛋白0.05-7份，二丙二醇或丙三醇0.1-1份，磷酸鹽或Tris-HCl緩沖溶液。