[發(fā)明專利]miR-208a-3p反義核酸在治療心肌缺血再灌注損傷中的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111432968.8
• 申請日: 2021-11-29
• 公開（公告）號: CN113995769A
• 公開（公告）日: 2022-02-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 曾秋棠;俞坤武;丁焱
• 申請（專利權(quán)）人: 華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院
• 主分類號: A61K31/7088
• 分類號: A61K31/7088;A61P9/10;C07H21/04;C07H1/00
• 代理公司: 武漢信合紅谷知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42264
• 代理人: 蔣明

本發(fā)明通過提出miR?208a?3p反義核酸在治療心肌缺血再灌注損傷中的應(yīng)用，并公開miR?208a?3p反義核酸的提取方法，通過小鼠對比實驗，明確miR?208a?3p反義核酸在心肌缺血再灌注損傷中起的治療作用，解決傳統(tǒng)心肌缺血再灌注損傷藥物治療效果不理想的問題，為心肌缺血再灌注損傷的治療開辟更廣闊的前景。

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種miR-208a-3p反義核酸在治療心肌缺血再灌注損傷中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

心肌缺血后再灌注損傷(MIRI)指冠狀動脈部分或完全急性阻塞后，在一定時間又重新獲得再通時，缺血心肌雖然得以恢復(fù)正常灌注，但其組織損傷反而呈進行性加重的病理過程。缺血期引起的心肌超微結(jié)構(gòu)、能量代謝、心功能和電生理等一系列損傷性變化，在血管再通后表現(xiàn)得更為突出，甚至可發(fā)生嚴重的心律失常而導(dǎo)致猝死。心內(nèi)直視手術(shù)、冠狀動脈搭橋術(shù)、冠狀動脈腔內(nèi)成形術(shù)、溶栓術(shù)后以及心肌內(nèi)側(cè)支循環(huán)血量突然增加等情況下，都可發(fā)生心肌缺血后再灌注損傷。對其發(fā)生機制認為主要與細胞內(nèi)氧自由基的大量產(chǎn)生、鈣離子超負荷、白細胞的炎癥作用及高能磷酸化合物缺乏等有關(guān)。隨著冠脈介入治療的普及，心肌缺血再灌注損傷成了一個不可避免的問題。針對心肌缺血再灌注損傷，相關(guān)技術(shù)中常用鈣離子拮抗劑、β-受體拮抗劑、氧自由基清除劑等藥物，來預(yù)防和控制因心肌缺血再灌注損傷所誘發(fā)心律失常、心猝死和心臟頓抑所致的心功能減退等心血管減退等心血管疾病的發(fā)生，但至今未獲得真正滿意的結(jié)果。因此，研發(fā)能減輕心肌缺血再灌注損傷的藥物具有重大意義。

microRNA(miRNAs)是一類廣泛存在于真核生物和病毒中的一類非編碼小RNA，約由18-22個核苷酸構(gòu)成。miRNAs是基因表達的負性調(diào)節(jié)者，可與靶基因3，端非編碼區(qū)mRNA的堿基互補配對形成沉默復(fù)合體(RISC)，進一步降解mRNA或阻遏其翻譯。由于其自身是一類非編碼RNA，自身不具備翻譯蛋白能力。近年多項研究表明研究表明，miRNAs直接參與心肌細胞死亡的調(diào)控，從而影響心肌缺血損傷的嚴重程度。有些miRNA也具備組織特異性，即它只在特定細胞中表達而不在其他組織器官中表達。miR-208a作為一類微小RNA，是特異性表達在心臟組織中，尤其是心肌細胞發(fā)揮作用，其主要是以3p段發(fā)揮作用。本設(shè)計的反義核酸可以在心肌細胞特異性結(jié)合miR-208a-3p，抑制其功能達到治療效果，而且由于miR-208a-3p只表達在心臟中不表達在其他器官。特異性的反義核酸只能針對miR-208a-3p，不會影響其他器官的功能。解決了傳統(tǒng)藥物非特異性以及副作用大的情況。

發(fā)明內(nèi)容：

(一)解決的技術(shù)問題

針對上述背景，本發(fā)明通過提出miR-208a-3p反義核酸在治療心肌缺血再灌注損傷中的應(yīng)用，旨在解決傳統(tǒng)心肌缺血再灌注損傷藥物治療效果不理想的技術(shù)問題，為心肌缺血再灌注損傷的治療開辟更廣闊的前景。

(二)技術(shù)方案

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

miR-208a-3p反義核酸在治療心肌缺血再灌注損傷中的應(yīng)用，所述miR-208a-3p的自身核苷酸序列為miRBase中登記號為IDs:MIMAT0000520的序列。

所述miR-208a-3p反義核酸序列和所述miR-208a-3p的自身核苷酸序列形成互補序列；

所述miR-208a-3p反義核酸的序列為TATTCTGCTCGTTTTTCGAACATT。

進一步地，所述miR-208a-3p反義核酸的提取方法為：

S1、脫保護

使用二氯乙酸或者三氯乙酸的二氯甲烷溶液去除寡核苷酸上的5”-DMT保護基團，暴露5”-OH，以供下一步偶聯(lián)；

S2、偶聯(lián)