[發明專利]miR-208a-3p反義核酸在治療心肌缺血再灌注損傷中的應用

在審

• 申請號: 202111432968.8
• 申請日: 2021-11-29
• 公開（公告）號: CN113995769A
• 公開（公告）日: 2022-02-01
• 發明（設計）人: 曾秋棠;俞坤武;丁焱
• 申請（專利權）人: 華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院
• 主分類號: A61K31/7088
• 分類號: A61K31/7088;A61P9/10;C07H21/04;C07H1/00
• 代理公司: 武漢信合紅谷知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42264
• 代理人: 蔣明

1.miR-208a-3p反義核酸在治療心肌缺血再灌注損傷中的應用。

2.根據權利要求1所述的miR-208a-3p反義核酸在治療心肌缺血再灌注損傷中的應用，其特征在于，所述miR-208a-3p的自身核苷酸序列為miRBase中登記號為IDs:MIMAT0000520的序列。

3.根據權利要求2所述的miR-208a-3p反義核酸在治療心肌缺血再灌注損傷中的應用，其特征在于，所述miR-208a-3p反義核酸序列和所述miR-208a-3p的自身核苷酸序列形成互補序列，所述miR-208a-3p反義核酸的序列為TATTCTGCTCGTTTTTCGAACATT。

4.根據權利要求1所述的miR-208a-3p反義核酸在治療心肌缺血再灌注損傷中的應用，其特征在于，所述miR-208a-3p反義核酸的提取方法為：

S1、脫保護

使用二氯乙酸或者三氯乙酸的二氯甲烷溶液去除寡核苷酸上的5”-DMT保護基團，暴露5”-OH，以供下一步偶聯；

S2、偶聯

待合成的亞磷酰胺單體與活化劑四唑混合并進入合成柱，形成亞磷酰胺四唑活性中間體，脫保護的5”-OH會與亞磷酰胺四唑活性中間體，形成新的磷氧鍵，并脫去四唑，在這一步核苷酸鏈得到延伸；

S3、氧化

偶聯反應生成的亞磷酯鍵，易被酸、堿水解，將此處三價磷氧化(硫化)為五價的磷，被氧化后形成的磷酸二酯(或硫代膦酸二酯)鍵，磷酸二酯鍵(或硫膦二酯)上有一個2-氰乙基保護，使磷酸二酯鍵在后續的合成中更穩定；

S4、加帽

為了防止5”-OH與下一個循環加入的亞磷酰胺單體發生偶聯反應，產生N-1雜質，對未參與偶聯的5”-OH加帽：使用乙酸酐和N-甲基咪唑形成乙酰化試劑，與未參與偶聯反應的5”-OH形成酯鍵；

由于傳統的反義核苷酸抑制miRNA效果差以及穩定性差，在此基礎上，對每個核苷酸的呋喃糖2‘碳加上甲基，兩端用磷硫酰修飾，并在3’處加入TT序列以穩定反義核酸；

設計序列為TATTCTGCTCGTTTTTCGAACATT，形成粉末后-20℃保存，使用時用生理鹽水0.2mL溶解。

5.根據權利要求1所述的miR-208a-3p反義核酸在治療心肌缺血再灌注損傷中的應用，其特征在于，所述miR-208a-3p反義核酸的應用方法為：無需和其他藥物配比，將保存在-20℃中的所述miR-208a-3p反義核酸粉末取出，2000G瞬時離心后以無菌生理鹽水溶解并以50mg/Kg使用量鼠尾注射進入手術后小鼠體內，小鼠注射中溶液總體積不超過0.2mL，防止小鼠由于注射溶液過多誘發心衰。