[發明專利]動態交聯水凝膠培養細胞的應用

在審

• 申請號: 202111429199.6
• 申請日: 2021-11-29
• 公開（公告）號: CN115558634A
• 公開（公告）日: 2023-01-03
• 發明（設計）人: 邊黎明;楊伯光;徐夏憶
• 申請（專利權）人: 海諾生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073;C12N5/078;A61K9/00;A61K9/06;A61K35/17;A61K35/545;A61K47/40;A61K47/42;A61L27/20;A61L27/22;A61L27/38;A61L27/50;A61L27/52
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫

1.一種動態交聯水凝膠在體外培養細胞中的應用，所述動態交聯水凝膠，是由明膠和交聯基團修飾的環糊精混合形成的水凝膠預聚體，混入細胞后，在交聯引發劑或光照的作用下發生交聯反應得到的動態交聯水凝膠；其中所述細胞為胚胎干細胞或免疫細胞。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，在使用所述動態交聯水凝膠培養胚胎干細胞的過程中無需使用飼養層細胞或分化抑制劑，而獲得保持多能性的胚胎干細胞；優選地，所述胚胎干細胞可在不少于60天內保持增殖且獲得的細胞克隆保持多能性。

3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述免疫細胞選自T細胞、NK細胞、DC細胞或CIK細胞中的一種或多種。

4.根據權利要求1-3任一項所述的應用，其特征在于，所述體外培養細胞包括將負載細胞的動態交聯水凝膠加入基礎培養基進行培養；優選地，所述基礎培養基選自MEM、F12、RPMI 1640、DMEM、MEM/F12、DEME/F12培養基中的一種。

5.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，交聯基團修飾的環糊精為丙烯酸酯化環糊精，所述丙烯酸酯化環糊精中丙烯酸酯基團與環糊精的摩爾比為0.8-1.8。

6.根據權利要求1所述的應用，其特征在于所述水凝膠預聚體中明膠的固含量為1-20％(w/v)，丙烯酸酯化環糊精的固含量為1-20％(w/v)。

7.一種體外三維培養細胞的方法，包括如下步驟：

1)將明膠和交聯基團修飾的環糊精混合形成水凝膠預聚體，并混入細胞，在化學交聯引發劑或光引發劑、光照條件下引發交聯反應得到負載細胞的動態交聯水凝膠；

2)將所述負載細胞的動態交聯水凝膠在基礎細胞培養基中培養；

其特征在于，所述細胞為胚胎干細胞或免疫細胞；在使用所述動態交聯水凝膠培養胚胎干細胞的過程中無需使用飼養層細胞或分化抑制劑，而獲得保持多能性的胚胎干細胞；優選地，所述胚胎干細胞可在不少于60天內保持增殖且獲得的細胞克隆保持多能性。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，在步驟2)后進一步包括向培養后的動態交聯水凝膠中加入膠原酶、金剛烷、叔丁基苯、布洛芬、香葉醇、薄荷醇、油酸中的一種或數種，降解所述動態交聯水凝膠，回收培養的細胞團簇。

9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述負載細胞的動態交聯水凝膠可不經回收細胞，將所述動態交聯水凝膠直接注射于體內后可降解。

10.一種動態交聯水凝膠在制備治療藥劑中的應用，其特征在于，將根據權利要求7所述的方法獲得的負載細胞的動態交聯水凝膠注射或填充于患者體內待治療的部位，實現遞送作用，優選地，所述動態交聯水凝膠還負載有治療藥物。