[發(fā)明專利]一種含有胞外多糖的提取物、胞外多糖及組合物

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111424249.1
• 申請(qǐng)日: 2021-11-26
• 公開（公告）號(hào): CN114163542A
• 公開（公告）日: 2022-03-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 耿麗麗;王美玲;張杰;束長(zhǎng)龍;王澤宇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所
• 主分類號(hào): C08B37/00
• 分類號(hào): C08B37/00;C12P19/02;C12P19/00;A01N43/16;A01N63/50;A01N63/23;A01P7/04;C12R1/07
• 代理公司: 北京聿華聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11611
• 代理人: 賈艷華

本發(fā)明涉及含有胞外多糖的提取物、胞外多糖及組合物，所述提取物從蘇云金芽胞桿菌中提取得到，主要組成為胞外多糖，對(duì)蘇云金芽胞桿菌殺蟲晶體蛋白和/或蘇云金芽胞桿菌營(yíng)養(yǎng)期殺蟲蛋白具有增效作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種含有胞外多糖的提取物，其從蘇云金芽胞桿菌中提取得到，主要組成為胞外多糖，其對(duì)蘇云金芽胞桿菌殺蟲晶體蛋白具有增效作用。

背景技術(shù)

細(xì)菌胞外多糖是細(xì)菌在生長(zhǎng)代謝過程中合成并分泌到胞外的多糖混合物，由相同或不同的單糖單元通過糖苷鍵聚合而成的長(zhǎng)鏈高分子聚合物。細(xì)菌產(chǎn)生的胞外多糖(Extracellular polysaccharides，簡(jiǎn)稱EPSs)，主要以兩種形式存在，與細(xì)胞表面緊密結(jié)合的莢膜多糖(Capsular polysaccharides，CPS)和以粘液形式分泌到細(xì)胞外的粘液多糖(“Slime”)，也稱游離胞外多糖(Free EPS)，其中少量的游離胞外多糖作為水溶性基質(zhì)是生物被膜的主要組成成分。以胞外多糖與細(xì)胞結(jié)合的緊密程度作為區(qū)分莢膜多糖和游離胞外多糖的方式不是絕對(duì)的，少量莢膜多糖與細(xì)胞表面磷脂連接不穩(wěn)定，可釋放到培養(yǎng)基中成為游離胞外多糖，而游離胞外多糖因與細(xì)胞緊密接觸可能成為莢膜多糖的成分。這些胞外多聚物質(zhì)的分布受細(xì)胞的自然生長(zhǎng)環(huán)境所影響，如培養(yǎng)液的化學(xué)性質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的豐富程度、細(xì)胞的生長(zhǎng)時(shí)期等。

細(xì)菌最外層莢膜多糖或胞外游離多糖的存在，導(dǎo)致其細(xì)胞膜與外界環(huán)境間存在一層額外的屏障。多糖的化學(xué)組成如單糖組成等結(jié)構(gòu)的多樣性，導(dǎo)致同一菌群不同物種的結(jié)構(gòu)存在差異，使其生物學(xué)功能呈現(xiàn)多樣性。此外，胞外多糖的一些理化特性如穩(wěn)定性、濃稠性、絮凝性、懸浮性、成膜性、持水能力等使其在不同的工業(yè)產(chǎn)業(yè)中廣泛應(yīng)用，如食品行業(yè)、化妝品業(yè)、制藥業(yè)、石油業(yè)、采礦業(yè)等。

除了少數(shù)革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，多數(shù)細(xì)菌胞外多糖屬于胞內(nèi)合成轉(zhuǎn)運(yùn)到胞外。其生物合成是分級(jí)進(jìn)行的：首先，在糖基轉(zhuǎn)移酶的作用下，糖核苷酸被組裝為“化學(xué)”寡糖重復(fù)單元；隨后在聚合酶的參與下，化學(xué)重復(fù)單元聚合成大分子多糖等“生物學(xué)”重復(fù)單元。大量的糖殘基組成多糖的主鏈，此外還包括一些非糖取代基，例如醋酸鹽、丙酮酸鹽、琥珀酸鹽、磷酸鹽等。細(xì)菌胞外多糖的組成、化學(xué)和物理特性決定多糖主要構(gòu)象，而這些特性會(huì)因細(xì)菌種類的不同而截然不同。如同一物種的細(xì)菌菌群可產(chǎn)生不同類型的莢膜多糖。因此不同的生物學(xué)功能逐步的被發(fā)掘，自然條件下，細(xì)菌胞外多糖可隱藏于細(xì)菌表面作為粘合劑與其它細(xì)菌表面或下層物質(zhì)相互作用、保護(hù)細(xì)菌抵抗外界環(huán)境的脅迫、作為細(xì)菌在根際聚集形成生物被膜的基質(zhì)并維持其穩(wěn)定性以及可作為細(xì)菌與外界“交流”的信號(hào)分子。在較惡劣的生長(zhǎng)環(huán)境中，細(xì)菌可將自身所分泌的胞外多糖作為碳源進(jìn)行利用。由于細(xì)菌胞外多糖的產(chǎn)量較低，導(dǎo)致其市場(chǎng)應(yīng)用受限。

近年來，化學(xué)、分子生物學(xué)以及影像技術(shù)的飛速發(fā)展，細(xì)菌胞外多糖的潛在功能仍待發(fā)掘。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明之一提供了一種含有胞外多糖的提取物，其通過如下步驟提取得到：

1)將蘇云金芽胞桿菌的發(fā)酵液pH值調(diào)至8至9，然后進(jìn)行第一離心，收集第一離心后的第一上清液；

2)在所述第一上清液中加入三氯乙酸或三氯乙酸的水溶液，從而用三氯乙酸處理所述第一上清液，得到第一處理液，然后進(jìn)行第二離心，收集第二離心后的第二上清液；

3)將所述第二上清液的pH值調(diào)至6至7后向所述第二上清液中加入乙醇，得到第二處理液，對(duì)所述第二處理液進(jìn)行沉淀，然后進(jìn)行第三離心，收集第三離心后的沉淀物，所述沉淀物即為濕的含有胞外多糖的提取物。

在一個(gè)具體實(shí)施方式中，將所述沉淀物進(jìn)行冷凍干燥，從而得到干的含有胞外多糖的提取物。

在一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述蘇云金芽胞桿菌為4D19菌株。

在一個(gè)具體實(shí)施方式中，在步驟2)中，所述三氯乙酸與第一上清液的質(zhì)量/體積含量為0.4％至0.5％。