[發(fā)明專利]催化活性提高的L-山梨酮脫氫酶突變體有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202111420059.2 | 申請日： | 2021-11-26 |
| 公開（公告）號： | CN113913400B | 公開（公告）日： | 2022-12-27 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 周景文;李冬;陳玥;李江華;陳堅(jiān);曾偉主 | 申請（專利權(quán)）人： | 江南大學(xué) |
| 主分類號： | C12N9/04 | 分類號： | C12N9/04;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P7/60;C12P17/04;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈爾濱市陽光惠遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211 | 代理人： | 仇鈺瑩 |
| 地址： | 214122 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 催化 活性 提高 山梨 脫氫酶 突變體 | ||
1.L-山梨酮脫氫酶突變體，其特征在于，所述突變體以氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的L-山梨酮脫氫酶為出發(fā)序列，將第167位置的甲硫氨酸替換為亮氨酸；或
以氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的L-山梨酮脫氫酶為出發(fā)序列，將第453位置的絲氨酸替換為丙氨酸；或
以氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的L-山梨酮脫氫酶為出發(fā)序列，將第460位置的亮氨酸替換為纈氨酸；或
以氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的L-山梨酮脫氫酶為出發(fā)序列，將第471位置的谷氨酸替換為天門冬氨酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的L-山梨酮脫氫酶突變體，其特征在于，氨基酸序列如SEQ IDNO.2~5任一所示。
3.編碼權(quán)利要求1或2所述L-山梨酮脫氫酶突變體的基因。
4.攜帶權(quán)利要求3所述基因的載體或重組細(xì)胞。
5.表達(dá)權(quán)利要求1或2所述L-山梨酮脫氫酶突變體的微生物細(xì)胞。
6.一種重組大腸桿菌，其特征在于，表達(dá)權(quán)利要求1或2所述的L-山梨酮脫氫酶突變體。
7.一種生產(chǎn)L-山梨酮脫氫酶的方法，其特征在于，將權(quán)利要求5所述的微生物細(xì)胞或權(quán)利要求6所述的重組大腸桿菌在培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時(shí)間，收集L-山梨酮脫氫酶。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，將所述重組大腸桿菌在TB培養(yǎng)基中，于35~40℃培養(yǎng)至菌體濃度達(dá)到OD600=0.6~1.0時(shí)降溫至18~25oC，并添加IPTG至終濃度0.5 mM誘導(dǎo)12-24 h時(shí)間，以表達(dá)L-山梨酮脫氫酶。
9.權(quán)利要求1或2所述的L-山梨酮脫氫酶突變體在生產(chǎn)2-酮基-L-古龍酸中的應(yīng)用。
10.權(quán)利要求6所述的重組大腸桿菌，或權(quán)利要求7或8所述的方法在生產(chǎn)維生素C或其前體物方面的應(yīng)用。
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