[發明專利]一種包載microRNA的外泌體的制備方法及其產品和應用

在審

• 申請號: 202111419096.1
• 申請日: 2021-11-26
• 公開（公告）號: CN114085817A
• 公開（公告）日: 2022-02-25
• 發明（設計）人: 李海源;盧俊鋒
• 申請（專利權）人: 三代康年（上海）醫療科技有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/113;A61K31/7088;A61K35/28;A61K9/72;A61K47/46;A61P11/00;A61P29/00
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 陳小龍

本發明提供了一種包載microRNA的外泌體的制備方法及其產品和應用，所述包載microRNA的外泌體由間充質干細胞直接分泌得到，每15mL脂肪組織獲得的外泌體以蛋白含量計算其產量，經microRNA包載的外泌體總蛋白可達95.13μg(SD＝8.43μg)，總RNA含量可達201.25μg(SD＝31.00μg)，未經microRNA包載的外泌體總蛋白含量僅為74.83μg(SD＝6.31μg)，總RNA含量僅為51.67μg(SD＝10.67μg)。該方法制備的外泌體含量更多且總RNA含量亦較高。本發明提供的制備方法在藥物生產中能減少步驟、增加產量和降低成本。

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，尤其涉及一種包載microRNA的外泌體的制備方法及其產品和應用。

背景技術

慢性阻塞性肺疾病是一種具有氣流阻塞特征的慢性支氣管炎和/或肺氣腫，其與有害氣體及有害顆粒的異常炎癥反應有關，臨床癥狀主要表現為慢性咳嗽、咳痰、氣短或呼吸困難等。慢性阻塞性肺疾病的治療藥物主要包括糖皮質激素、免疫抑制劑、支氣管擴張藥物及靶向藥物等。

專利CN103830299A公開了一種治療慢性阻塞性肺疾病的藥物組合物，所述藥物組合物含有總黃酮和總皂苷，從中藥紫菀和款冬花中提取有效成分，制得含有紫菀皂苷E為代表的總皂苷和蘆丁為代表的總黃酮的組合物。所述藥物組合物原料來源易得、成本低廉且易于產業化，可根據需要制成相應的劑型，為臨床治療提供安全有效和質量可控的現代中藥。

專利CN109498625A公開了一種治療慢性阻塞性肺疾病的藥物組合物，所述藥物組合物包括蒼耳噻嗪二酮和糖皮質激素兩種活性成分。蒼耳噻嗪二酮及蒼耳噻嗪二酮與糖皮質激素的組合物均可以有效改善慢性阻塞性肺疾病的患者的肺部功能，緩解相關臨床癥狀，其中蒼耳噻嗪二酮與糖皮質激素的組合使用能在維持類似的治療效果的同時，顯著降低糖皮質激素的有效劑量，，減少糖皮質激素的使用，從而降低糖皮質激素的副作用。

由于慢性阻塞性肺疾病屬于衰老性和不可逆性的慢性疾病，目前的藥物并不能逆轉已經存在的病變，且其中糖皮質激素和免疫抑制劑的長期使用會導致多種并發癥，危害身體健康。慢性阻塞性肺疾病患者迫切需要能夠逆轉病變且具有較高安全性的治療藥物。因此提供一種安全有效的用于治療慢性阻塞性肺疾病的藥物具有重要作用。

發明內容

本發明的目的在于提供一種包載microRNA的外泌體的制備方法及其產品和應用。所述包載microRNA的外泌體由間充質干細胞直接分泌得到，由間充質干細胞直接分泌得到的外泌體的產量更高，每15mL脂肪組織獲得的外泌體的以蛋白含量計算其產量，經microRNA包載的外泌體總蛋白可達95.13μg(SD＝8.43μg)，而未經該microRNA包載的外泌體總蛋白含量僅為74.83μg(SD＝6.31μg)；經microRNA包載的外泌體總RNA含量可達201.25μg(SD＝31.00μg)，而未經該microRNA包載的外泌體總RNA含量僅為51.67μg(SD＝10.67μg)。該方法制備的外泌體含量更多(以蛋白含量計)，且總RNA含量亦較高。

本發明提供的制備方法在藥物生產中能減少步驟、增加產量和降低成本。同時所述包載microRNA的外泌體因其不具有完整的細胞結構，在治療過程中成瘤風險低，治療的安全性更高；能夠改善慢性阻塞性肺疾病的衰老表型、減少肺組織內的炎性細胞(如中性粒細胞、CD8⁺T細胞等)、降低炎性因子水平(如腫瘤壞死因子α、IL-8等)和阻止肺纖維化過程。