[發(fā)明專利]誘導(dǎo)蝴蝶蘭種子產(chǎn)生多倍體并提高萌發(fā)率的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111409102.5
• 申請(qǐng)日: 2021-11-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114568304A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-06-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賈瑞冬;吳婷;葛紅;楊樹(shù)華;趙鑫;寇亞平;李秋香
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00;A01H1/08;A01H6/62
• 代理公司: 北京威禾知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11838
• 代理人: 王月玲

本發(fā)明提供了一種誘導(dǎo)蝴蝶蘭種子產(chǎn)生多倍體并提高種子萌發(fā)率的方法，包括：(a)收集蝴蝶蘭種子并分裝到茶葉袋中；(b)將所述種子滅菌；(c)在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)滅菌后的種子，持續(xù)不同的時(shí)間(0、5、10d)；(d)向培養(yǎng)基中加入秋水仙素，使其濃度為0.05％、0.1％、0.2％，處理不同天數(shù)(1、3、5d)；(e)將步驟(d)的種子播種至第一固體培養(yǎng)基，60d后統(tǒng)計(jì)其萌發(fā)率；以及任選地，(f)統(tǒng)計(jì)種子萌發(fā)率和/或鑒定種子倍性。本發(fā)明的方法通過(guò)利用蝴蝶蘭種子染色體加倍的適宜誘導(dǎo)條件提高了多倍體的比率和種子的萌發(fā)率，為蝴蝶蘭多倍體育種技術(shù)的優(yōu)化提供了數(shù)據(jù)支撐。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于多倍體育種技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及利用秋水仙素誘導(dǎo)蝴蝶蘭(例如象鼻蘭)種子產(chǎn)生多倍體并提高種子萌發(fā)率。

背景技術(shù)

蝴蝶蘭屬(Phalaenopsis)植物因其花大色艷而備受歡迎，象鼻蘭 (Phalaenopsiszhejiangensis)，原為蘭科象鼻蘭屬(Nothodoritis)植物，后來(lái)被歸類于蝴蝶蘭屬植物，是我國(guó)特有珍稀蘭科植物^[1]，已作為一級(jí)保護(hù)植物列入國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)野生植物名錄(二)。象鼻蘭植物個(gè)體極少，主要分布在浙江，又因環(huán)境因素、人為采摘等瀕臨滅絕，染色體數(shù)目為2n＝2x＝38^[2][3]，而蝴蝶蘭栽培種主要為四倍體、三倍體和非整倍體^[4]，[5][6]。象鼻蘭植株小，花朵小，花量大，花型奇特，萼片、花瓣為白色且內(nèi)面具紫色橫紋^[1]，是培育趣味蝴蝶蘭、小花型蝴蝶蘭的優(yōu)良親本。由于染色體大小和倍性差異，很難將二倍體原生種的優(yōu)良基因轉(zhuǎn)入栽培種^[7][8]。通過(guò)多倍體誘導(dǎo)可以更好的融合象鼻蘭與其他蝴蝶蘭的優(yōu)良基因。且多倍體常具有植株粗壯、花朵較大、抗逆性較強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，因此多倍體誘導(dǎo)是培育蝴蝶蘭新品種的一項(xiàng)重要育種技術(shù)。

在蘭科植物中，現(xiàn)有技術(shù)一般采用秋水仙素、氨磺靈等化學(xué)試劑對(duì)種子^[9][10]、原球莖^[11]-[15]、從生芽^[16]-[18]、莖段^[19]、葉片^[20][21]等在組織培養(yǎng)的條件下進(jìn)行染色體加倍誘導(dǎo)，但在蝴蝶蘭屬植物中尚未有對(duì)種子進(jìn)行染色體加倍技術(shù)的研究。

針對(duì)目前蝴蝶蘭屬植物染色體加倍技術(shù)不穩(wěn)定、加倍率較低的問(wèn)題，且缺乏對(duì)種子染色體加倍技術(shù)的相關(guān)研究，亟需一種新的技術(shù)來(lái)提高蝴蝶蘭屬植物多倍體誘導(dǎo)率，同時(shí)提高種子萌發(fā)率，從而為培育觀賞價(jià)值高的蝴蝶蘭新種質(zhì)奠定基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，本發(fā)明的第一方面提供了一種誘導(dǎo)蝴蝶蘭(例如象鼻蘭)種子產(chǎn)生多倍體及提高種子萌發(fā)率的方法，包括以下步驟：

(a)收集蝴蝶蘭種子并分裝到茶葉袋中；

(b)將所述種子滅菌；

(c)在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)滅菌后的所述種子，持續(xù)第一時(shí)間段，其中所述第一時(shí)間段為例如0-10d(例如0、5、10d)；

(d)向所述液體培養(yǎng)基中添加秋水仙素，使所述秋水仙素的濃度為例如0.05％-0.2％(例如0.05％、0.1％、0.2％)，處理第二時(shí)間段，其中所述第二時(shí)間段為例如1-5d(例如1、3、5d)；以及

(e)將步驟(d)所得種子播種至第一固體培養(yǎng)基，任選地，60d后統(tǒng)計(jì)其萌發(fā)率。

在一些實(shí)施方案中，其中步驟(c)中，所述液體培養(yǎng)基為： 1/2MS+20g.L^-1蔗糖+100g.L^-1椰汁。在一些實(shí)施方案中，其中步驟(e) 中，所述第一固體培養(yǎng)基為：1/2MS+20g.L^-1蔗糖+100g.L^-1椰汁+5.0 g.L^-1瓊脂。