[發明專利]一種Aureobasidin A發酵液的純化方法

在審

• 申請號: 202111401556.8
• 申請日: 2021-11-19
• 公開（公告）號: CN114230638A
• 公開（公告）日: 2022-03-25
• 發明（設計）人: 石磊;鄭玲輝;朱進偉;彭湘屏;張敏;高祥;陳世敏;汪超
• 申請（專利權）人: 浙江琿達生物科技有限公司
• 主分類號: C07K7/56
• 分類號: C07K7/56;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/16
• 代理公司: 北京領科知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11690
• 代理人: 張丹

本發明具體涉及一種Aureobasidin A發酵液的純化方法。本發明提供的分離純化技術工藝路線降低生產成本更具備產業化的可能同時能穩定獲得高質量產品。

技術領域

本發明涉及微生物制藥技術領域，具體涉及一種Aureobasidin A發酵液的純化方法。特別是適用于Aureobasidin A高產菌株CGMCC NO.20887發酵液的純化。

背景技術

巴西芬凈(Aureobasidin A，AbA)是一種由9個氨基酸分子組成的環脂肽類抗生素，最早在1991年由日本Kazutoh Takesako團隊從黑酵母Aureobasidiumpullulans的培養液中分離獲得。巴西芬凈具有很強的抗真菌能力，對其敏感的真菌種類包括：出牙酵母(Saccharomycescerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomycespombe)、光滑念珠菌(Candidaglabrata)、構巢曲霉(Aspergillusnidulans)和黑曲霉(A.niger.)。其作用機制是，巴西芬凈抑制了真菌生長所依賴的肌醇磷酰胺(inositolphosphorylceramide，IPC)合成酶的活性，干擾鞘脂合成，從而進一步殺死菌株。并且，巴西芬凈不會破壞DNA，RNA和蛋白質的合成。

分離純化Aureobasidin A最早是由Kazutoh Tkaesako等于1991年在《TheJournal Of Antibiotics》發表的一篇名為《AUREOBASIDINS,NEW ANTIFUNGALANTIBIOTICS,TAXONOMY,FERMENTATION,ISOLATION,AND PROPERTIES》的文獻中介紹了Aureobasidin A的發酵，純化及其相關性質。其純化方法主要包括：離心分離得到菌渣，乙醇浸提，濃縮后乙酸乙酯萃取，硅膠層析及液相制備分離得到各個組分，但是該方法不僅采用離心分離導致生產效率較低、增加生產成本，而且收率偏低。

Ahmed Abdel-Lateff等于2009年在《Natural Product Communications》發表了一篇名為《Aureobasidin,New Antifouling Metabolite from Marine-Derived FungusAureobasidium sp.》的文獻介紹了題述菌株所產的一系列Aureobasidin化合物的性質及鑒定，也簡單提到了他們所使用的分離純化方法，即：離心分離得到菌渣，乙酸乙酯浸提，硅膠層析及半制備分離得到各個組分。但是該方法并不能穩定的獲得高質量的成品。

發明內容

為克服現有技術的不足，本發明提供一種Aureobasidin A的純化方法。具體地，上述方法包括如下步驟：

(1)溶劑浸提

(2)硅膠洗脫

(3)高壓制備

(4)粗品結晶

具體的，上述步驟(1)包括：取產Aureobasidin A菌種發酵的得到的發酵液，通過過濾裝置固液分離得到濕菌渣，烘干后得干菌渣。使用有機溶劑浸提所述的干菌渣，將所得的浸提液在一定溫度下，減壓真空濃縮至不再滴出液體，得濃縮液。

根據本發明的實施例，上述Aureobasidin A發酵液生產菌株為菌株CGMCCNO.20887。

根據本發明的實施例，步驟(1)中的烘干溫度為30～60℃。

根據本發明的實施例，步驟(1)中浸提使用的有機溶劑選自氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、己烷，優選二氯甲烷、乙酸乙酯，更優選乙酸乙酯。

根據本發明的實施例，步驟(1)中減壓真空濃縮的溫度為20℃～50℃，優選30℃～50℃。