[發(fā)明專(zhuān)利]一種Aureobasidin A發(fā)酵液的純化方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111401556.8
• 申請(qǐng)日: 2021-11-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114230638A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-03-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 石磊;鄭玲輝;朱進(jìn)偉;彭湘屏;張敏;高祥;陳世敏;汪超
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 浙江琿達(dá)生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K7/56
• 分類(lèi)號(hào): C07K7/56;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/16
• 代理公司: 北京領(lǐng)科知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11690
• 代理人: 張丹

1.一種Aureobasidin A的純化方法，其包括如下步驟：

(1)溶劑浸提：對(duì)由產(chǎn)Aureobasidin A菌種發(fā)酵得到的發(fā)酵液過(guò)濾得到濕菌渣，將所述濕菌渣使用有機(jī)溶劑浸提后，減壓真空濃縮至不再滴出液體，得濃縮液；

(2)硅膠洗脫：將步驟(1)的濃縮液上樣于硅膠柱，以流動(dòng)相洗脫至結(jié)束，合并組分后經(jīng)濃縮得到干組分；

(3)高壓制備：使用高壓液相制備色譜儀進(jìn)行分離，且經(jīng)過(guò)濃縮得Aureobasidin A粗品；

(4)粗品結(jié)晶：對(duì)Aureobasidin A粗品進(jìn)行溶解、析出、干燥得到Aureobasidin A成品。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)包括：取產(chǎn)Aureobasidin A菌種發(fā)酵得到的發(fā)酵液，通過(guò)過(guò)濾裝置固液分離得到濕菌渣，烘干后得干菌渣；使用有機(jī)溶劑浸提所述的干菌渣，將所得的浸提液在一定溫度下，減壓真空濃縮至不再滴出液體，得濃縮液。

3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，浸提使用的有機(jī)溶劑選自氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、己烷，優(yōu)選二氯甲烷、乙酸乙酯，更優(yōu)選乙酸乙酯；減壓真空濃縮的溫度為20℃～50℃，優(yōu)選30℃～50℃。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)包括：將步驟(1)所得的濃縮液用正己烷混勻上樣于硅膠柱，上樣結(jié)束后，以流動(dòng)相洗脫至結(jié)束樣單位低于10μg/mL，合并組分后濃縮至干。

5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述的流動(dòng)相為正己烷：異丙醇，其體積比選自3:1～6:1，優(yōu)選3:1～5:1。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)包括：使用高壓液相制備色譜儀進(jìn)行分離，將步驟(2)獲得的干組分上柱后再以流動(dòng)相洗脫，根據(jù)液相結(jié)果合并組分，即得Aureobasidin A粗品液；將所述的Aureobasidin A粗品液濃縮至白色固體析出，加入乙酸乙酯攪拌后靜置分液，干燥脫水后過(guò)濾，取濾液；將上述濾液濃縮至干，即得AureobasidinA粗品。

7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，洗脫使用的流動(dòng)相為乙腈：水，其體積比選自5:5、6:4、7:3、8:2，優(yōu)選7:3、8:2。

8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(4)包括：將步驟(3)得到的Aureobasidin A粗品加入乙酸乙酯溶解配制成結(jié)晶前液，緩慢滴加正己烷，析出晶體后過(guò)濾得到結(jié)晶濕品，將所述結(jié)晶濕品干燥后即得Aureobasidin A成品。

9.如權(quán)利要求1～8之一所述的方法，其特征在于，所得的Aureobasidin A成品總收率在49.5％以上，純度在98.3％以上。