[發明專利]一種替格瑞洛用藥相關細胞色素酶P450家族基因突變位點的檢測方法

在審

• 申請號: 202111393802.X
• 申請日: 2021-11-23
• 公開（公告）號: CN114262734A
• 公開（公告）日: 2022-04-01
• 發明（設計）人: 夏海劍;李京洲;吳浩芳
• 申請（專利權）人: 蘇州華謙科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 蘇州吳韻知識產權代理事務所(普通合伙) 32364
• 代理人: 朱亮

本發明涉及一種替格瑞洛用藥相關細胞色素酶P450家族基因突變位點的檢測方法，通過設計的目標位點特異性引物的單管多重PCR擴增反應得到目標片段，PCR產物經過限制性內切酶消化，然后再利用單堿基延技術，通過雙向延伸，得到待檢基因位點，最后通過核酸質譜分析精確測定目標DNA序列。本發明通過檢測替格瑞洛用藥相關細胞色素酶P450家族基因CYP2C19?1、CYP2C19?2、CYP2C19?3、CYP3A4、CYP2C9片段中的突變位點可以評估被檢樣本對于替格瑞洛的相關性，可以用于對應藥物的用藥指導，具有較大的應用價值。

技術領域

本發明涉及DNA測序應用技術領域，特別是涉及一種替格瑞洛用藥相關細胞色素酶P450家族基因突變位點的檢測方法。

背景技術

肝臟的細胞色素酶P450家族在藥物的代謝中起著重要作用，它將藥物由疏水型轉化為更易排泄的親水型。生物轉化反應一般可分為細胞色素P450依賴的I相和II相結合反應。已清楚藥物的肝外代謝對體內藥物總的降解起一定的作用。胃腸道內的生物轉化是非常重要的，因為它可降低口服藥物的生物利用度。遺傳多態性、酶抑制、酶誘導及生理因素均可引起細胞色素酶P450活性的改變。這有一定的臨床含意，因為這會引起藥物藥代動力學的改變，導致藥物效能改變，因代謝減少或毒性代謝物生成增多而增加藥物毒性，以及導致藥物的相互作用。有證據表明CYP2C19等細胞色素酶P450家族基因的多態性與藥物的個體差異密切相關，通過檢測患者CYP2C19等細胞色素酶P450家族的基因型，判斷患者代謝速率類型，合理調整用藥劑量，是提高相關疾病治愈率,減少毒副作用的有效途徑，尤其像氯吡格、雷伏立康唑、抗抑郁類藥物、抗癲癇藥物等。

替格瑞洛的商品名為倍林達，是一種血小板聚集抑制劑，其臨床療效和安全性已得到血小板抑制和患者后果結局研究(PLATO研究)及其多項亞組研究的驗證和支持。藥物基因組學研究表明，替格瑞洛在體內的代謝水平與細胞色素酶P450家族的CYP2C19等基因的表型密切相關。FDA在該藥的說明也提出了這一點。因此，用藥前檢測相關基因的變異情況，能有效輔助替格瑞洛的臨床用藥，對患者有重要的指導意義。目前市場上的相關核酸質譜檢測技術均是采用單向單堿基延伸技術來進行的，而單向單堿基延伸難以對變異位點進行精確確定，給替格瑞洛的治療應用帶來了一定消極影響。

發明內容

基于此，有必要針對上述現有技術中的不足，提供一種替格瑞洛用藥相關細胞色素酶P450家族基因突變位點的檢測方法。

一種替格瑞洛用藥相關細胞色素酶P450家族基因突變位點的檢測方法，通過設計的目標位點特異性引物的單管多重PCR擴增反應得到目標片段，PCR產物經過限制性內切酶消化，然后再利用單堿基延技術，通過雙向延伸，得到待檢基因位點，最后通過核酸質譜分析精確測定目標DNA序列。

上述替格瑞洛用藥相關細胞色素酶P450家族基因突變位點的檢測方法，通過雙向單堿基延伸的技術，對人類替格瑞洛用藥相關細胞色素酶P450家族基因進行精確的變異檢查，從而為個體臨床用藥提供安全指導。

在其中一個實施例中，所述目標位點特異性引物包括：

用于擴增替格瑞洛用藥相關細胞色素酶P450家族基因CYP2C19-1片段的特異性引物，正向引物為：SEQ ID Nos：31，反向引物為SEQ ID Nos：32；

用于擴增替格瑞洛用藥相關CYP2C19-2片段的特異性引物，正向引物為：SEQ IDNos：33，反向引物為SEQ ID Nos：34；

用于擴增替格瑞洛用藥相關CYP2C19-3片段的特異性引物，正向引物為：SEQ IDNos：35，反向引物為SEQ ID Nos：36；

用于擴增替格瑞洛用藥相關CYP3A4片段的特異性引物，正向引物為：SEQ ID Nos：37，反向引物為SEQ ID Nos：38；