[發明專利]一種替格瑞洛用藥相關細胞色素酶P450家族基因突變位點的檢測方法

在審

• 申請號: 202111393802.X
• 申請日: 2021-11-23
• 公開（公告）號: CN114262734A
• 公開（公告）日: 2022-04-01
• 發明（設計）人: 夏海劍;李京洲;吳浩芳
• 申請（專利權）人: 蘇州華謙科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 蘇州吳韻知識產權代理事務所(普通合伙) 32364
• 代理人: 朱亮

1.一種替格瑞洛用藥相關細胞色素酶P450家族基因突變位點的檢測方法，其特征在于，通過設計的目標位點特異性引物的單管多重PCR擴增反應得到目標片段，PCR產物經過限制性內切酶消化，然后再利用單堿基延技術，通過雙向延伸，得到待檢基因位點，最后通過核酸質譜分析精確測定目標DNA序列。

2.根據權利要求1所述的替格瑞洛用藥相關細胞色素酶P450家族基因突變位點的檢測方法，其特征在于，所述目標位點特異性引物包括：

用于擴增替格瑞洛用藥相關細胞色素酶P450家族基因CYP2C19-1片段的特異性引物，正向引物為：SEQ ID Nos：31，反向引物為SEQ ID Nos：32；

用于擴增替格瑞洛用藥相關CYP2C19-2片段的特異性引物，正向引物為：SEQ ID Nos：33，反向引物為SEQ ID Nos：34；

用于擴增替格瑞洛用藥相關CYP2C19-3片段的特異性引物，正向引物為：SEQ ID Nos：35，反向引物為SEQ ID Nos：36；

用于擴增替格瑞洛用藥相關CYP3A4片段的特異性引物，正向引物為：SEQ ID Nos：37，反向引物為SEQ ID Nos：38；

用于擴增替格瑞洛用藥相關CYP2C9片段的特異性引物，正向引物為：SEQ ID Nos：39，反向引物為SEQ ID Nos：40。

3.根據權利要求1所述的替格瑞洛用藥相關細胞色素酶P450家族基因突變位點的檢測方法，其特征在于，所述單堿基延伸技術所用的引物包括：

用于擴增替格瑞洛用藥相關細胞色素酶P450家族基因CYP2C19-1片段的單堿基延伸引物，序列為SEQ ID Nos：101和SEQ ID Nos：102；

用于擴增替格瑞洛用藥相關CYP2C19-2片段的單堿基延伸引物，序列為SEQ ID Nos：SEQ ID Nos：103和SEQ ID Nos：104；

用于擴增替格瑞洛用藥相關CYP2C19-3片段的單堿基延伸引物，序列為SEQ ID Nos：105和SEQ ID Nos：106；

用于擴增替格瑞洛用藥相關CYP3A4片段的單堿基延伸引物，序列為SEQ ID Nos：107和SEQ ID Nos：108；

用于擴增替格瑞洛用藥相關CYP2C9片段的單堿基延伸引物，序列為SEQ ID Nos：109和SEQ ID Nos：110。

4.根據權利要求3所述的替格瑞洛用藥相關細胞色素酶P450家族基因突變位點的檢測方法，其特征在于，在所述單堿基延伸引物的5`端均加入10nt的固定序列ACGTTGGATG。

5.根據權利要求1所述的替格瑞洛用藥相關細胞色素酶P450家族基因突變位點的檢測方法，其特征在于，所述單管多重PCR擴增的反應程序為：95℃2分鐘，95℃30秒，56℃20秒，72℃60秒，45循環，72℃5分鐘，4℃保溫。

6.根據權利要求1所述的替格瑞洛用藥相關細胞色素酶P450家族基因突變位點的檢測方法，其特征在于，所述限制性內切酶為蝦堿性磷酸酶。

7.根據權利要求1所述的替格瑞洛用藥相關細胞色素酶P450家族基因突變位點的檢測方法，其特征在于，所述限制性內切酶消化處理的條件為：37℃消化處理45分鐘，85℃加熱變性5分鐘，冰浴10分鐘。

8.根據權利要求1所述的替格瑞洛用藥相關細胞色素酶P450家族基因突變位點的檢測方法，其特征在于，所述雙向延伸反應的程序為：94℃30秒；95℃5秒，52℃5秒，80℃，5秒，5個循環，40個循環；72℃3分鐘，4℃保溫。