[發(fā)明專利]一種不動桿菌及其應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111386106.6
• 申請日: 2021-11-22
• 公開（公告）號: CN114107102A
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發(fā)明（設計）人: 趙曉祥;亢昕;段興帆;許中碩;王宇暉;宋新山
• 申請（專利權）人: 東華大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C02F3/30;C02F3/34;C02F101/16;C12R1/01
• 代理公司: 上海泰能知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 31233
• 代理人: 孫健

本發(fā)明涉及一種不動桿菌及其應用，不動桿菌(Acinetobacteroleivorans)KX?3的保藏編號為CGMCC No.23119，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本發(fā)明菌株在乙酸鈉為碳源，菌株接種量為0.5％，C/N＝12，pH＝10.0，溫度15℃條件下，可去除76.7％的氨氮與67.2％的NO₃^?。為生物脫氮提供了良好的菌種資源。

技術領域

本發(fā)明屬于微生物領域，特別涉及一種不動桿菌及其應用。

背景技術

當今，因人類活動影響，城市河道及相對開放的水域氨氮指標高居不下。由此引發(fā)的生態(tài)環(huán)境問題已經(jīng)對人類居家環(huán)境和城市形象產(chǎn)生重大影響。傳統(tǒng)上，養(yǎng)分主要通過生物處理去除，而生物養(yǎng)分去除過程需要替代厭氧/好氧條件，使得處理系統(tǒng)復雜且耗能。微生物修復水環(huán)境成為目前研究的熱點領域，目前在針對污水水體氨氮、亞硝酸鹽、硝酸鹽的去除也正在隨著對硝化細菌，反硝化細菌的研究而逐漸提升到新的層次。

生物脫氮主要依靠硝化過程和反硝化過程兩個階段，但參與到這兩個過程的微生物生長和處理能力會受到pH,溫度，溶解氧，C/N，接種量等各方面的影響。由于溫度是影響微生物活性的主要因素，而低溫下實現(xiàn)高效穩(wěn)定的生物脫氮較為困難。據(jù)已有的研究表明，反硝化作用適合的溫度范圍是25℃-35℃，低于25℃反硝化作用會得到抑制。而耐冷菌由于其不同的生理構造、低溫下活躍的酶活性及適應性寬泛的溫度范圍，在環(huán)境工程和生物應用等多領域受到廣泛研討和實際應用。在低溫下分離和篩選具有耐冷性的脫氮功能菌對于微生物脫氮領域顯得意義重大。

發(fā)明內容

本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種不動桿菌及其應用，填補現(xiàn)有低溫微生物脫氮的空白。

本發(fā)明的一種不動桿菌，不動桿菌(Acinetobacter oleivorans)KX-3的保藏編號為CGMCC No.23119，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本發(fā)明的一種所述不動桿菌篩選方法(堿性條件下耐低溫同步異養(yǎng)硝化-好氧反硝化微生物菌株的分離方法)，包括：

(1)菌株富集：將土壤和無菌水混合，得到懸液，然后將1mL懸液于富集培養(yǎng)基中，10-15℃振蕩培養(yǎng)2-3天；

(2)將取步驟(1)中的富集培養(yǎng)液，加入反硝化培養(yǎng)基中，10-15℃振蕩培養(yǎng)46-50h，得到富集液；

(3)取步驟(2)富集液加入反硝化培養(yǎng)基中，10-15℃振蕩培養(yǎng)，并測試NO₃^-的去除效率；重復該步驟直到NO₃^-的去除效率達到穩(wěn)定80％以上；

(4)取步驟(3)NO₃^-去除率達到穩(wěn)定80％以上的懸液進行稀釋，10^-1～10^-8涂布在溴百里酚藍培養(yǎng)基中，于15℃培養(yǎng)直至出現(xiàn)可見的菌株周邊變藍菌落；

(5)將上述步驟(4)中長出的變藍菌落用接種環(huán)挑出至固體LB培養(yǎng)基平板上，反復劃線3-5次，直到出現(xiàn)單菌落為止。

(6)菌株反硝化能力測定：將上述步驟(5)中純化出的單菌落用無菌接種環(huán)挑出至反硝化液體培養(yǎng)基中，于15℃，150r/min振蕩，每隔4h測定菌株反硝化能力；

(7)菌株硝化能力測定：挑選上述步驟(6)高效脫除NO₃^-的反硝化菌轉入硝化培養(yǎng)基進一步測試NH₄⁺-N的去除能力。

上述步驟的優(yōu)選方式如下：

所述步驟(1)中土壤和無菌水的體積比例為1:9。

所述步驟(1)中土壤為取南極拉斯曼丘陵地區(qū)的土壤。