[發(fā)明專利]一種不動(dòng)桿菌及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111386106.6
• 申請(qǐng)日: 2021-11-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114107102A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-03-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙曉祥;亢昕;段興帆;許中碩;王宇暉;宋新山
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 東華大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N1/02;C02F3/30;C02F3/34;C02F101/16;C12R1/01
• 代理公司: 上海泰能知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31233
• 代理人: 孫健

1.一種不動(dòng)桿菌，其特征在于，不動(dòng)桿菌(Acinetobacter oleivorans)KX-3的保藏編號(hào)為CGMCC No.23119，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一種權(quán)利要求1所述不動(dòng)桿菌篩選方法，包括：

(1)將土壤和無(wú)菌水混合，得到懸液，然后將懸液于富集培養(yǎng)基中，10-15℃振蕩培養(yǎng)2-3天；

(2)將取步驟(1)中的富集培養(yǎng)液，加入反硝化培養(yǎng)基中，10-15℃振蕩培養(yǎng)46-50h，得到富集液；

(3)取步驟(2)富集液加入反硝化培養(yǎng)基中，10-15℃振蕩培養(yǎng)，并測(cè)試NO₃^-的去除效率；重復(fù)該步驟直到NO₃^-的去除效率達(dá)到穩(wěn)定80％以上；

(4)取步驟(3)NO₃^-去除率達(dá)到穩(wěn)定80％以上的懸液進(jìn)行稀釋，10^-1～10^-8涂布在溴百里酚藍(lán)培養(yǎng)基中，于15℃培養(yǎng)直至出現(xiàn)可見(jiàn)的菌株周邊變藍(lán)菌落；

(5)將上述步驟(4)中長(zhǎng)出的變藍(lán)菌落用接種環(huán)挑出至固體LB培養(yǎng)基平板上，反復(fù)劃線3-5次，直到出現(xiàn)單菌落為止；

(6)將上述步驟(5)中單菌落用無(wú)菌接種環(huán)挑出至反硝化液體培養(yǎng)基中，于15℃，150r/min振蕩，每隔4h測(cè)定菌株反硝化能力；

(7)將上述步驟(6)高效脫除NO₃^-的反硝化菌轉(zhuǎn)入硝化培養(yǎng)基進(jìn)一步測(cè)試NH₄⁺-N的去除能力。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述方法，其特征在于，所述土壤和無(wú)菌水體積比為1:9。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述方法，其特征在于，所述步驟(1)中富集培養(yǎng)基配方為:蛋白胨5.0g，酵母5.0g，NaCl 30.0g，pH 7.0±0.2，蒸餾水1L。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述方法，其特征在于，所述步驟(2)、(3)中反硝化培養(yǎng)基配方為:醋酸鈉1.3g，硝酸鉀0.722g，磷酸二氫鉀0.877g，七水合硫酸鎂0.2g,2ml微量元素，pH 7.0±0.2，蒸餾水1L。微量元素：EDTA 10.0g，硫酸鋅0.2g，四水合氯化錳1.2g,七水合硫酸亞鐵1.0g,五水合硫酸銅0.5g，六水合氯化鈷0.3g，二水合鉬酸鈉0.2g，氯化鈣0.1g，pH 7.0±0.2，蒸餾水1L。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述方法，其特征在于，所述步驟(1)-(3)中振蕩均為130-150r/min。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述方法，其特征在于，所述步驟(4)中溴百里酚藍(lán)培養(yǎng)基配方為:醋酸鈉1.3g，硝酸鉀0.722g，磷酸二氫鉀0.877g，七水合硫酸鎂0.2g，微量元素2ml，瓊脂20g，1％溴百里酚藍(lán)1ml pH 7.0±0.2，蒸餾水1L。

8.根據(jù)權(quán)利要求2所述方法，其特征在于，所述步驟(7)中硝化培養(yǎng)基配方為:醋酸鈉1.3g，氯化銨0.382g，磷酸二氫鉀0.877g，七水合硫酸鎂0.2g，微量元素2ml，pH 7.0±0.2，蒸餾水1L。

9.一種權(quán)利要求1所述不動(dòng)桿菌在生物脫氮中的應(yīng)用。