[發明專利]一種用于神經元絲狀蛋白磁微粒化學發光免疫檢測試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 202111373442.7
• 申請日: 2021-11-19
• 公開（公告）號: CN114217069A
• 公開（公告）日: 2022-03-22
• 發明（設計）人: 劉丹;周虹橋;孫悅
• 申請（專利權）人: 上海普然生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/58
• 代理公司: 湖南喬熹知識產權代理事務所(普通合伙) 43262
• 代理人: 安曼

本發明公開了一種用于神經元絲狀蛋白磁微粒化學發光免疫檢測試劑盒及其檢測方法，其中，所述試劑盒包括磁珠包被的AD7c?NTP單克隆抗體Ⅰ包被物、堿性磷酸酶標記的AD7c?NTP單克隆抗體Ⅱ結合物、校準品和校準品緩沖液。本發明的神經元絲狀蛋白含量試劑盒以磁微粒子作為免疫反應的固相，利用化學發光免疫分析方法與化學發光類測定儀配合，用于測定人體樣本中的神經元絲狀蛋白含量，避免了酶聯免疫試劑盒存在的線性范圍窄、操作繁瑣等缺點，且解決了靈敏度低、穩定性差、成本高等缺陷，該試劑盒與目前專用于科研的ELISA試劑盒相比，檢測范圍寬，制備工藝簡單價格低廉，靈敏度高，重復性好，線性寬，性能超過目前科研的ELISA試劑盒產品。

技術領域

本發明涉及一種用于神經元絲狀蛋白磁微粒化學發光免疫檢測試劑盒及其檢測方法，屬于分子免疫學領域。

背景技術

阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是人在老年期最常見的中樞神經系統退行性疾病，是引起癡呆的最常見的病因。臨床上表現為智力水平的慢性削弱及記憶的慢性丟失。據報道，隨著全球人口的老齡化，AD發病率也與日俱增，到2050年將增至1.15～1.35億。由于目前仍沒有有效的治療方法來預防、制止或逆轉阿爾茨海默病；AD的唯一有效的治療方法是延緩或減輕癥狀。因此，AD的早期診斷至關重要。

目前，盡管可以使用包括磁共振成像，PET和示蹤劑在內的成像方法來幫助AD的早期診斷，但成本昂貴且需要高水平的檢測人員，因此不能用作常規的早期檢測方法。通過腦脊液檢測Aβ和Tau蛋白也可以達到類似的目的，但是它是有創性的，不能廣泛用于AD的早期篩查。因此，理想的生物標志物檢測應具有指導明確，成本低，不易感染的優點。

AD7c-NTP是NTP家族中的一個成員，是由Suzanne M.de la Monte等首次從AD晚期患者的顳葉中分離出一個新的包含Alu序列cDNA，被命名為AD7c-NTP，其序列全長為1442bp，含有1125個核苷酸組成的ORF，可編碼含375個氨基酸的成熟蛋白，分子質量約為41kD，等電點為9.89。已有文獻公開了利用生物信息學方法發現AD7c-NTP基因定位于lp36.11的負鏈上，無內含子序列，編碼產物可能存在3個跨膜區的相關內容。

1996年de la Monte教授發現，AD7c-NTP在AD腦內表達水平升高，與tau-1共存，與p-tau水平正相關，且出現在組織學尚完整的變性神經元中，證明異常AD7c-NTP蛋白表達增加是AD神經變性的早期事件。隨后大量研究表明AD7c-NTP大量存在于AD患者腦中的神經原纖維纏結(neurofibrillary tangles，NFT)中，主要與誘發神經炎癥及細胞死亡有關。

最新的研究發現，尿液中AD7c-NTP的分子質量與腦脊液和腦組織中相同，且AD患者尿樣中AD7C-NTP水平的檢測與CSF中AD7C-NTP的檢測具有同樣的意義。作為一種非侵入性測試，尿液樣本中AD7c-NTP的檢測比腦脊液樣本的檢測更為重要，更易于為患者接受和推廣，更適合于高危人群的早期篩查。有望成為診斷阿爾茨海默氏病的一種新的有用的生物標志物。

目前，已有專利文獻公開了對AD7c-NTP的檢測方法，主要以ELISA法為主，如CN202021178022.4公開了一種快速檢測的免疫層析試紙條。試紙條將表面修飾了ADc-NTP單克隆抗體Ⅰ的熒光微球噴涂在聚酯膜上得到探針固定墊，AD7c-NTP單克隆抗體2包被在檢測膜檢測線上，兔抗鼠lgG抗體包被在檢測膜的質控線上；CN201911296997.9公開了一種ELISA神經絲蛋白體外診斷試劑盒。用包被有AD7c-NTP單克隆抗體Ⅰ的微孔板和辣根過氧化物酶(HRP)標記AD7c-NTP抗體Ⅱ，在與待測標本中相應的抗原發生免疫反應后，形成固相包被抗體-待測抗原-酶標記抗體復合物，經洗滌后，加入顯色液顯色。但ELISA法線性范圍窄、操作繁瑣等弊端也存在于這些檢測方法上。因此，需要設計一款更為通用的神經元絲狀蛋白磁微粒免疫檢測試劑盒。

發明內容