[發明專利]一種用于神經元絲狀蛋白磁微粒化學發光免疫檢測試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 202111373442.7
• 申請日: 2021-11-19
• 公開（公告）號: CN114217069A
• 公開（公告）日: 2022-03-22
• 發明（設計）人: 劉丹;周虹橋;孫悅
• 申請（專利權）人: 上海普然生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/58
• 代理公司: 湖南喬熹知識產權代理事務所(普通合伙) 43262
• 代理人: 安曼

1.一種用于神經元絲狀蛋白磁微粒化學發光免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括磁珠包被的AD7c-NTP單克隆抗體Ⅰ包被物、堿性磷酸酶標記的AD7c-NTP單克隆抗體Ⅱ結合物、校準品和校準品緩沖液。

2.根據權利要求1所述的用于神經元絲狀蛋白磁微粒化學發光免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述磁珠包被的AD7c-NTP單克隆抗體1包被物為表面包裹有AD7c-NTP單克隆抗體Ⅰ包被物的超順磁性納米材料，粒徑為10～30nm。

3.根據權利要求1所述的用于神經元絲狀蛋白磁微粒化學發光免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述堿性磷酸酶標記的AD7c-NTP單克隆抗體Ⅱ酶結合物為堿性磷酸酶和神經元絲狀蛋白抗體的偶聯物。

4.根據權利要求3所述的用于神經元絲狀蛋白磁微粒化學發光免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述神經元絲狀蛋白抗體為小鼠單克隆抗體。

5.根據權利要求1所述的用于神經元絲狀蛋白磁微粒化學發光免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述校準品為人AD7C-NTP，終濃度為240ug/mL。使用時用生物樣品稀釋液稀釋至4800pg/ml、2400pg/mL、1200pg/mL、600pg/mL、300pg/mL、150pg/mL六個梯度。

6.根據權利要求5所述的用于神經元絲狀蛋白磁微粒化學發光免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述校準品使用時用校準品稀釋液稀釋至4800pg/ml、2400pg/mL、1200pg/mL、600pg/mL、300pg/mL、150pg/mL六個梯度。

7.一種采用根據權利要求1～6任一項所述的用于神經元絲狀蛋白磁微粒化學發光免疫檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

a.加樣和孵育：將待測樣本、校準品分別等體積加入反應管中，然后加入等體積的堿性磷酸酶標記的AD7c-NTP單克隆抗體Ⅱ酶結合物和磁珠包被的AD7c-NTP單克隆抗體Ⅰ包被物，孵育反應形成AD7c-NTP單克隆抗體Ⅱ-神經元絲狀蛋白-AD7c-NTP單克隆抗體Ⅰ復合物；

b.磁分離清洗：將步驟a)中孵育完成的反應管放置在磁分離架上，靜置后除去上清，加入磁珠包被物緩沖液清洗后再次將反應管放置在磁分離架上靜置后除去上清，反復清洗；

c.發光檢測：加入酶促發光底物液避光孵育，測量發光值；

d.計算含量：將待測樣本的發光強度與校準品的標準曲線比對，使用四參數Logistic方程擬合可計算出待測樣本中AD7c-NTP的含量。

8.根據權利要求7所述的用于神經元絲狀蛋白磁微粒化學發光免疫檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，所述待測樣本、校準品、堿性磷酸酶標記的AD7c-NTP單克隆抗體Ⅱ酶結合物和磁珠包被的AD7c-NTP單克隆抗體Ⅰ包被物均為等體積加入，加入體積為每種50μL。

9.根據權利要求7所述的用于神經元絲狀蛋白磁微粒化學發光免疫檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，所述磁珠包被的AD7c-NTP單克隆抗體Ⅰ包被物采用如下步驟制備：將超順磁微粒加入PBS緩沖液中，加入神經元絲狀蛋白抗體，37℃反應18小時得到神經元絲狀蛋白抗體的磁珠包被物。。

10.根據權利要求7所述的用于神經元絲狀蛋白磁微粒化學發光免疫檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，所述堿性磷酸酶標記的AD7c-NTP單克隆抗體Ⅱ酶結合物采用如下步驟制備：將堿性磷酸酶加入碳酸鈉緩沖液中，加入神經元絲狀蛋白抗體，37℃反應4小時后，用ProteinG親和柱純化酶標抗體，得到AD7c-NTP單克隆抗體Ⅱ酶結合物。