[發(fā)明專利]基于生物素-鏈霉親和素系統(tǒng)的透明質(zhì)酸酶定量測定方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202111370793.2
• 申請日: 2021-11-18
• 公開（公告）號: CN113933507A
• 公開（公告）日: 2022-01-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫菁;黃鵬;劉軍;張弛;劉西燕;張妍;程欣;韓佳迪;單藝瑋;林凡佳
• 申請（專利權(quán)）人: 東曜藥業(yè)有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/543;G01N33/533
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11250
• 代理人: 張丹錫

1.一種定量測定樣本中透明質(zhì)酸酶的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

捕捉步驟：將樣本與含有磁珠1的工作試劑1混合后進行孵育，得到孵育液1；所述磁珠1上偶聯(lián)有透明質(zhì)酸酶抗體；

結(jié)合步驟：將孵育液1與含有生物素的工作試劑2混合后進行孵育，得到孵育液2；所述生物素偶聯(lián)在透明質(zhì)酸酶抗體上；

標(biāo)記步驟：將孵育液2與含有鏈霉親和素的工作試劑3混合后進行孵育，得到孵育液3；所述鏈霉親和素上偶聯(lián)有熒光標(biāo)記；

重懸步驟：收集并清洗孵育液3中的磁珠1后，將磁珠1重懸于工作試劑4中，得到重懸液；

檢測步驟：測定重懸液的熒光強度值，并根據(jù)熒光強度值與透明質(zhì)酸酶濃度之間的關(guān)系，計算樣本中透明質(zhì)酸酶的濃度。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述捕捉步驟前，還包括前處理步驟；所述前處理步驟為：將樣本與含有磁珠2的工作試劑5混合后進行孵育，孵育結(jié)束后，去除樣本中的磁珠2，得到經(jīng)前處理的樣本；所述磁珠2上偶聯(lián)有鏈霉親和素。

3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述熒光標(biāo)記為FITC；所述測定重懸液的熒光強度值為：用酶標(biāo)儀測定重懸液于激發(fā)波長為485nm、發(fā)射波長為528nm處的熒光強度值。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述計算為：將熒光強度值帶入根據(jù)熒光強度值與透明質(zhì)酸酶濃度之間的關(guān)系擬合而得的擬合方程；所述擬合方程如下：

擬合方程中，x為樣本中透明質(zhì)酸酶的濃度，單位ng/mL，y為重懸液的熒光強度值。

5.如權(quán)利要求1～4任一項所述的方法，其特征在于，所述磁珠1為甲苯磺?；胖?、羧基磁珠、氨基磁珠、羥基磁珠或環(huán)氧基磁珠中的至少一種。

6.如權(quán)利要求1～5任一項所述的方法，其特征在于，所述甲苯磺?；胖榈牧綖?.5～2μm。

7.如權(quán)利要求1～6任一項所述的方法，其特征在于，所述甲苯磺?；胖楹屯该髻|(zhì)酸酶抗體的偶聯(lián)比例為1mg：5～30μg。

8.如權(quán)利要求1～7任一項所述的方法，其特征在于，所述工作試劑1、工作試劑2、工作試劑3、工作試劑4和/或工作試劑5的成分包含緩沖劑、鹽和蛋白質(zhì)保護劑。

9.一種用于定量測定樣本中透明質(zhì)酸酶的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括含有磁珠1的工作試劑1、含有生物素的工作試劑2以及含有鏈霉親和素的工作試劑3；所述磁珠1上偶聯(lián)有透明質(zhì)酸酶抗體；所述生物素偶聯(lián)在透明質(zhì)酸酶抗體上；所述鏈霉親和素上偶聯(lián)有熒光標(biāo)記。

10.權(quán)利要求1～8任一項所述的方法或權(quán)利要求9任一項所述的試劑盒在透明質(zhì)酸酶定量測定中的應(yīng)用。