[發(fā)明專利]靈芝酸LTHA和LTCA的生物轉化與提取方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111367661.4
• 申請日: 2021-11-17
• 公開（公告）號: CN114231587B
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發(fā)明（設計）人: 馮昆;吳海波;鄭春輝
• 申請（專利權）人: 遵義醫(yī)科大學珠海校區(qū)
• 主分類號: C12P33/00
• 分類號: C12P33/00;C07J9/00;C12R1/645
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 俞梁清

本發(fā)明屬于靈芝酸制備技術領域，公開了一種靈芝酸LTHA和LTCA的生物轉化與提取方法。該生物轉化方法是以二氫丹參酮Ⅰ為底物，經與無柄靈芝菌共培養(yǎng)，轉化得到含有靈芝酸LTHA和LTCA的培養(yǎng)物。該生物轉化方法具有工藝簡單、反應條件溫和、轉化率高的特點；該提取方法則克服了此兩種靈芝酸分離困難的缺陷，為其工業(yè)化生產提供了基礎，具有很好的市場經濟價值。

技術領域

本發(fā)明屬于靈芝酸制備技術領域，尤其涉及靈芝酸LTHA和LTCA的生物轉化與提取方法。

背景技術

靈芝是我國著名的食藥兼用大型真菌，現代科學研究已表明靈芝中三萜類成分靈芝酸具有廣泛的生物學活性，包括有抗腫瘤，抗HIV-1，免疫調節(jié)，降血脂，降血糖，抗氧化等活性，因而常被認為是發(fā)現抗腫瘤，抗HIV-1，免疫調節(jié)方面藥物的潛在候選者。

目前靈芝酸來源主要為靈芝子實體提取、靈芝孢子粉破壁提取和液體發(fā)酵。其中，靈芝子實體和靈芝孢子粉中靈芝酸的成分受生長環(huán)境、品種等諸多因素影響，差異較大，質量難以控制。液體發(fā)酵雖然可以通過控制發(fā)酵條件和外源誘導子提高原有靈芝酸成分的含量，但是靈芝酸增加幅度和種類有限。在植物靈芝中，lanosta-7,9(11),24-trien-15α,22β-diacetoxy-3β-hydroxy-26-oic?acid(LTHA)和lanosta-7,9(11),24-trien-15α,22β-diacetoxy-3β-carbonyl-26-oic?acid(LTCA)是兩種稀有的靈芝酸，豐度較低，限制了上述靈芝酸在制藥工業(yè)中的應用。

因此，本發(fā)明希望提供一種靈芝酸LTHA和LTCA的生物轉化方法，為解決此兩種稀有靈芝酸資源短缺的問題提供新的途徑。

發(fā)明內容

本發(fā)明旨在至少解決上述現有技術中存在的技術問題之一。為此，本發(fā)明提出一種靈芝酸LTHA和LTCA的生物轉化與提取方法，該生物轉化方法具有工藝簡單、反應條件溫和、轉化率高的特點；該提取方法則克服了此兩種靈芝酸分離困難的缺陷，為其工業(yè)化生產提供了基礎，具有很好的市場經濟價值。

本發(fā)明提供了一種靈芝酸LTHA和LTCA的生物轉化方法，以二氫丹參酮Ⅰ為底物，經與無柄靈芝菌(Ganoderma?sessile)共培養(yǎng)，轉化得到含有靈芝酸LTHA和LTCA的培養(yǎng)物。

上述生物轉化方法的反應路線如下：

經前期試驗發(fā)現，當使用4種常見食藥用菌(香菇菌，無柄靈芝菌，蛹蟲草菌和猴頭菌)分別轉化7種具有靈芝酸骨架的化合物(丹參酮I，二氫丹參酮I，丹參酮IIA，丹參酮IIA磺酸鈉，隱丹參酮，膽固醇和膽酸)時，只有無柄靈芝菌與二氫丹參酮I共培養(yǎng)的組合才能實現向靈芝酸LTHA和LTCA的轉化，而其他組合均未產生相同轉化。

優(yōu)選的，所述生物轉化方法所使用培養(yǎng)基的組分包括：蛋白胨2-10g/L，葡萄糖5-15g/L，磷酸二氫鉀0.5-1.2g/L，硫酸鎂0.1-0.8g/L，水。所述培養(yǎng)基中還可包含氯霉素等抗生素。

更優(yōu)選的，所述生物轉化方法所使用培養(yǎng)基的組分包括：蛋白胨5g/L，葡萄糖10g/L，磷酸二氫鉀1g/L，硫酸鎂0.5g/L，水。

更優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基的pH為6.2-6.6。

優(yōu)選的，所述生物轉化方法中將無柄靈芝菌的菌絲以5％-10％的接種量進行接種。

優(yōu)選的，所述生物轉化方法中加入二氫丹參酮Ⅰ后的終濃度為30-60μg/mL。

優(yōu)選的，所述生物轉化方法中共培養(yǎng)的時間為5-15天。

本發(fā)明還提供了一種靈芝酸LTHA和LTCA的提取方法，包括以下步驟：

(1)采用上述生物轉化方法得到培養(yǎng)物，收集菌絲體，經提取、萃取和濃縮，得到提取物；