[發(fā)明專利]靈芝酸LTHA和LTCA的生物轉(zhuǎn)化與提取方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111367661.4
• 申請(qǐng)日: 2021-11-17
• 公開（公告）號(hào): CN114231587B
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馮昆;吳海波;鄭春輝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 遵義醫(yī)科大學(xué)珠海校區(qū)
• 主分類號(hào): C12P33/00
• 分類號(hào): C12P33/00;C07J9/00;C12R1/645
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 俞梁清

1.一種靈芝酸LTHA和LTCA的生物轉(zhuǎn)化方法，其特征在于，以二氫丹參酮Ⅰ為底物，經(jīng)與無(wú)柄靈芝菌共培養(yǎng)，轉(zhuǎn)化得到含有靈芝酸LTHA和LTCA的培養(yǎng)物；

所述生物轉(zhuǎn)化方法所使用培養(yǎng)基的組分包括：蛋白胨?2-10?g/L，葡萄糖?5-15?g/L，磷酸二氫鉀?0.5-1.2?g/L，硫酸鎂?0.1-0.8?g/L，水；

所述培養(yǎng)基的pH為6.2-6.6；

所述生物轉(zhuǎn)化方法中共培養(yǎng)的時(shí)間為5-15天；

所述生物轉(zhuǎn)化的培養(yǎng)溫度設(shè)置為26℃、28℃或30℃。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物轉(zhuǎn)化方法，其特征在于，所述生物轉(zhuǎn)化方法中將無(wú)柄靈芝菌的菌絲以5%-10%的接種量進(jìn)行接種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物轉(zhuǎn)化方法，其特征在于，所述生物轉(zhuǎn)化方法中加入二氫丹參酮Ⅰ后的終濃度為30-60?μg/mL。

4.一種靈芝酸LTHA和LTCA的提取方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）采用權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的生物轉(zhuǎn)化方法得到培養(yǎng)物，收集菌絲體，經(jīng)提取、萃取和濃縮，得到提取物；所述提取的步驟為：采用80%甲醇對(duì)菌絲體進(jìn)行超聲提取；

（2）利用硅膠色譜柱對(duì)所述提取物依次采用乙酸乙酯與石油醚體積比為1:30、1:15、1:10、1:5的混合洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，再采用薄層色譜法檢測(cè)，待薄層展開后吹干，與5%H₂SO₄-EtOH溶液顯色反應(yīng)，并在254?nm紫外光下合并相似組分，得到待純化物；

（3）采用半制備高效液相色譜對(duì)所述待純化物進(jìn)行純化，得到靈芝酸LTHA和LTCA；

所述半制備高效液相色譜的條件參數(shù)包括：

色譜柱：ZORBAX?SB-C18，5?μm，9.4×250?mm；

流動(dòng)相組成：

流動(dòng)相A：乙腈；流動(dòng)相B：0.03%甲酸水溶液；

梯度洗脫條件：

0-30?min：流動(dòng)相A?60%-90%，流動(dòng)相B?余量。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的提取方法，其特征在于，步驟（2）中所述薄層色譜法采用硅膠G薄層板，以乙酸乙酯與石油醚體積比為1:15的混合溶劑進(jìn)行檢測(cè)。