[發明專利]利用與大白菜花色相關的分子標記進行輔助育種的方法

在審

• 申請號: 202111364506.7
• 申請日: 2021-11-17
• 公開（公告）號: CN113999931A
• 公開（公告）日: 2022-02-01
• 發明（設計）人: 劉中良;高俊杰
• 申請（專利權）人: 泰安市農業科學研究院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6806;A01H1/04;A01H6/20
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務所(普通合伙) 11491
• 代理人: 張國棟

1.一種利用與大白菜花色相關的分子標記進行輔助育種的方法，其特征在于，所述利用與大白菜花色相關的分子標記進行輔助育種的方法包括：

步驟一，進行大白菜心葉顏色分子標記的篩選；選擇心葉為白色的大白菜作為母本，選擇心葉為桔紅色或黃色的大白菜作為父本，將父本與母本進行雜交獲得F1代心葉為白色的大白菜；

步驟二，利用得到的F1代心葉為白色的大白菜進行自交，得到F2代心葉為白色的大白菜；

步驟三，以得到的F2代心葉為白色的大白菜為母本，以初始心葉為白色的大白菜為父本進行回交，得到F3代心葉為白色的回交大白菜；

步驟四，對得到的得到F3代心葉為白色的回交大白菜，利用預先篩選得到的分子標記進行輔助選擇心葉為桔紅色或黃色目的性狀基因轉移的個體，獲得F4代心葉為白色的大白菜；

步驟五，利用F4代心葉為白色的的大白菜進行自交，得到F5代心葉為白色的大白菜；

步驟六，重復步驟四至步驟五兩次，在得到的大白菜群體中篩選出心葉為桔紅色或黃色的大白菜，并依次自交、回交一次，得到心葉為桔紅色或黃色的大白菜自交系。

2.如權利要求1所述利用與大白菜花色相關的分子標記進行輔助育種的方法，其特征在于，所述進行大白菜心葉顏色分子標記的篩選包括：

取白色心葉純合自交系大白菜、黃色心葉純合自交系以及桔紅色心葉純合自交系進行雜交，得到雜交大白菜，雜交后培育獲得重組自交系；

分別提取白色心葉純合自交系大白菜、黃色心葉純合自交系以及桔紅色心葉純合自交系親本基因組DNA，利用SSR引物進行PCR擴增，篩選多態性SSR引物；

利用多態性SSR引物構建大白菜遺傳連鎖圖譜；利用描述統計對群體數據實施正態性檢驗，對不契合正態分布的表現型數據進行標準化處理，對心葉花色突變位點進行QTL定位分析，確定與大白菜心葉花色連鎖的分子標記。

3.如權利要求2所述利用與大白菜花色相關的分子標記進行輔助育種的方法，其特征在于，所述提取基因組DNA包括：

使用離心管取適量的親本白菜嫩葉圓片，向離心管中放入1粒直徑為3mm鋼珠，蓋上離心管蓋后進行粉碎；

向大白菜粉末中加入適量的0.2mol/L的NaOH溶液，混勻后將離心管置沸水浴中45s，再加120μL的Tris-Hcl，混勻后將所述離心管置沸水浴中1.5min，并離心；

取離心后的上清液到新的試管中，再加入1000μL的Tris-Hcl進行稀釋溶解。

4.如權利要求3所述利用與大白菜花色相關的分子標記進行輔助育種的方法，其特征在于，所述粉碎包括：在組織破碎機上以60-80次/s的轉速破碎30-40s。

5.如權利要求3所述利用與大白菜花色相關的分子標記進行輔助育種的方法，其特征在于，所述Tris-Hcl包括：pH＝7.5，質量分數為0.5mol/L。

6.如權利要求3所述利用與大白菜花色相關的分子標記進行輔助育種的方法，其特征在于，所述離心包括：3000rpm離心6-8min。

7.如權利要求2所述利用與大白菜花色相關的分子標記進行輔助育種的方法，其特征在于，所述進行QTL定位分析包括：

設定QTL的顯著性水平為0.05，利用分析軟件進行模擬運算，得到LOD的閾值；當某一位點的LOD值大于閾值時，則存在一個顯著QTL位點；

采用區間作圖法和完備區間作圖法進行QTL定位，并估算QTL位置、加性效應、對表型變異的加性貢獻率，及存在的QTL定位區間。

8.如權利要求1所述利用與大白菜花色相關的分子標記進行輔助育種的方法，其特征在于，所述對得到的得到F3代心葉為白色的回交大白菜，進行分子標記輔助選擇心葉為桔紅色或黃色目的性狀基因轉移的個體包括：

提取所述F3代心葉為白色的回交大白菜的DNA，并利用篩選得到的分子標記進行PCR擴增；

對擴增產物進行聚丙烯酰胺凝膠電泳，選擇F3代心葉為白色的回交大白菜中電泳帶型與心葉為桔紅色或黃色的大白菜相同的大白菜。