[發明專利]一種熒光標記適配體金屬有機框架探針的制備方法及其應用

在審

• 申請號: 202111362649.4
• 申請日: 2021-11-17
• 公開（公告）號: CN114045329A
• 公開（公告）日: 2022-02-15
• 發明（設計）人: 何俊琳;鄭姝婷;于超
• 申請（專利權）人: 重慶醫科大學
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;G01N33/53;C12Q1/02;C09K11/06;C08G83/00;G01N21/64
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1.一種熒光標記適配體金屬有機框架探針的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)將48mg對苯二甲酸和67.2mg四氯化鋯各分散在12mL的DMF溶液中，得到澄清溶液；將兩者混合后再加入至16mL DMF溶液中，然后邊攪拌邊加入2mL醋酸；之后在90℃油浴中加熱12小時后得到鋯金屬有機框架溶液，取出冷卻至室溫；所得溶液以10000rpm/min離心5min，使用無水乙醇離心清洗3次后，真空干燥過夜，得到白色固體狀鋯金屬有機框架；

(2)將熒光基團標記的T20 DNA與熒光猝滅基團標記的A10 DNA分別分散在Tris-HCl中，然后以摩爾濃度比1:1.5的比例混合；將混合物放在95℃的水浴鍋中加熱10min后，置于室溫放置1小時，使T20/A10雙鏈充分雜交；

(3)將100μg/mL鋯金屬有機框架溶液與100nM雙鏈DNA溶液相混合，常溫孵育1小時，得到混合物；

(4)將上步所得的混合物用Tris-HCl溶液離心清洗3次后，重懸于1mL Tris-HCl溶液中，儲存在4℃備用。

2.根據權利要求1所述的一種熒光標記適配體金屬有機框架探針，其特征在于:步驟(1)中，澄清溶液的摩爾比為：鋯離子：對苯二甲酸：DMF＝0.56:0.51:1000。

3.根據權利要求1所述的一種熒光標記適配體金屬有機框架探針，其特征在于:步驟(2)中，T20 DNA序列為:TTT TTT TTT TTT TTT TTT TT，其標記的熒光基團為AMCA，A10 DNA序列為:AAA AAA AAA A，其標記的猝滅基團為Dabcyl。

4.權利要求2-3任一項所述的一種熒光標記適配體金屬有機框架探針用于檢測環境中的汞離子。

5.權利要求2-3任一項所述的一種熒光標記適配體金屬有機框架探針用于汞離子的活細胞內成像。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于包括以下步驟:

(1)將細胞以5萬個/孔的濃度接種于含有細胞爬片的24孔板中，在37℃、5％CO2、飽和濕度的細胞培養箱中培養12h；

(2)將不同濃度的Hg²⁺加入到步驟(1)的24孔板中，在37℃、5％CO₂、飽和濕度的細胞培養箱中培養12h；

(3)將Zr-MOFs-T20/A10探針加入到步驟(2)的24孔板中，在37℃、5％CO₂、飽和濕度的細胞培養箱中培養2h；

(4)棄去步驟(3)的24孔板中的培養基，用磷酸鹽緩沖液沖洗三次；

(5)在步驟(4)的24孔板中加入300μl/孔多聚甲醛，孵育15min，以固定細胞形態；

(6)棄去步驟(5)的24孔板中的多聚甲醛，并使用磷酸鹽緩沖液沖洗三次；

(7)滴加綠豆大小的甘油于載玻片上，將爬片的細胞面覆蓋于甘油上，然后在爬片四周刷上封片油；

(8)將步驟(7)中制備好的樣本用激光共聚焦顯微鏡進行拍攝成像。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于：所述的Zr-MOFs-T20/A10探針的終濃度為100μg/mL，孵育時間為2h。