[發(fā)明專(zhuān)利]一種鹽酸氨酮戊酸有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111360171.1
• 申請(qǐng)日: 2021-11-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114264734A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-04-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 薛逸君;蔣劍平;陳毓婷
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海復(fù)旦張江生物醫(yī)藥股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 蘇州隆恒知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32366
• 代理人: 金京

本發(fā)明提供了一種鹽酸氨酮戊酸有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，該方法為反相高效液相色譜法，包含配制pH值為2.0±0.2的辛烷磺酸鈉緩沖液，進(jìn)而配制乙腈占10％～20％(v/v)的辛烷磺酸鈉緩沖液?乙腈作為流動(dòng)相，再將以鹽酸氨酮戊酸為主成分的待測(cè)樣品，用所述流動(dòng)相將其配制成濃度為10mg/ml的供試品溶液，取1ml所述供試品溶液置于20ml量瓶中，用所述流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，再制作對(duì)照品溶液進(jìn)行檢測(cè)操作。本發(fā)明的鹽酸氨酮戊酸有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法專(zhuān)屬性好，對(duì)各有關(guān)物質(zhì)的檢出靈敏度高，雜質(zhì)峰與主峰可實(shí)現(xiàn)完全分離，且所能檢測(cè)出的物質(zhì)種類(lèi)也更多，能鑒定出鹽酸氨酮戊酸在降解過(guò)程中產(chǎn)生的4種雜質(zhì)，且其中兩種是以前從未被鑒定出的新物質(zhì)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥物分析技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種鹽酸氨酮戊酸有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

鹽酸氨酮戊酸(Aminolevulinic Acid Hydrochloride)，其化學(xué)名為5-氨基-4-酮戊 酸鹽酸鹽，分子式：C₅H₉NO₃·HCl，分子量：167.59。氨酮戊酸(ALA)的代謝是人 體內(nèi)亞鐵血紅素合成的生化途徑的第一步。ALA自身不是光敏劑，而是光敏劑原卟 啉IX(PpIX)的代謝前體。ALA的合成通常是由細(xì)胞內(nèi)亞鐵血紅素水平通過(guò)ALA 合成酶反饋抑制調(diào)控。外源性的ALA避開(kāi)這種調(diào)節(jié)，導(dǎo)致PpIX的累積。皮膚應(yīng)用 鹽酸氨酮戊酸后因ALA轉(zhuǎn)化為PpIX并累積而產(chǎn)生光敏性。當(dāng)暴露在一定波長(zhǎng)和能 量的光照下，累積的PpIX就會(huì)產(chǎn)生光動(dòng)力效應(yīng)，一種光和氧依賴性的細(xì)胞毒作用： PpIX吸收光后處于激發(fā)態(tài)，其隨后與氧分子發(fā)生電子傳遞而產(chǎn)生高度活性的單線態(tài) 氧和自由基。應(yīng)用ALA后病灶的光敏性與特定波長(zhǎng)和能量的光照是ALA光動(dòng)力治療 的基礎(chǔ)。

鹽酸氨酮戊酸在堿性溶液及光照條件下不穩(wěn)定，在高溫條件下也會(huì)緩慢降解產(chǎn)生雜質(zhì)。為了保證產(chǎn)品的安全、有效，需要對(duì)雜質(zhì)進(jìn)行控制，因此對(duì)其有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè) 是產(chǎn)品質(zhì)量控制的重要指標(biāo)。

至今，鹽酸氨酮戊酸有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法僅在美國(guó)藥典中有收錄，詳見(jiàn)下文對(duì)比例中的記載。該方法存在以下缺陷：(1)鹽酸氨酮戊酸由于極性很大，在反相體系中 無(wú)法保留，故主峰在色譜柱死體積處出峰，與溶劑峰并不能有效分離，對(duì)于高濃度樣 品溶液，色譜峰發(fā)生了肩峰現(xiàn)象。(2)雜質(zhì)檢出個(gè)數(shù)較少，僅能鑒定出2,5-二丙酸吡 嗪(雜質(zhì)A)和3-(4＇-羰基戊酸)-2,5-二丙酸吡嗪(雜質(zhì)B)這兩種主要雜質(zhì)，其 余雜質(zhì)均無(wú)法檢出或定位，甚至尚存在未被鑒定的雜質(zhì)。

故而，有必要對(duì)鹽酸氨酮戊酸有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法進(jìn)行優(yōu)化，以得到靈敏度更高、檢出物質(zhì)種類(lèi)更多的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種靈敏度更高的鹽酸氨酮戊酸有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法。

本發(fā)明的目的通過(guò)如下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)：

本發(fā)明提供一種鹽酸氨酮戊酸有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法為反相高效液相色譜法，包含以下步驟：

(1)溶液配制：

A)配制pH值為2.0±0.2的辛烷磺酸鈉緩沖液，進(jìn)而配制乙腈占10～20％ (v/v)的辛烷磺酸鈉緩沖液-乙腈作為流動(dòng)相；

B)將以鹽酸氨酮戊酸為主成分的待測(cè)樣品，用所述流動(dòng)相將其配制成濃 度為10mg/ml的供試品溶液；

C)取1ml所述供試品溶液置于20ml量瓶中，用所述流動(dòng)相稀釋至刻度， 搖勻，再取5ml所述供試品溶液置于50ml量瓶中，用所述流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻， 作為對(duì)照溶液；

D)取2，5-二丙酸吡嗪(以下記為雜質(zhì)A)作為對(duì)照品，用50％乙腈水 溶液超聲30秒后加所述流動(dòng)相溶解配制成濃度為20μg/ml的對(duì)照品溶液；

(2)色譜條件：色譜柱填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠；檢測(cè)波長(zhǎng)為紫外波長(zhǎng)； 柱溫為25℃～30℃；流速為0.5ml/min～1.0ml/min；