[發(fā)明專(zhuān)利]篩選提高惡唑霉素類(lèi)化合物產(chǎn)量的共培養(yǎng)體系的方法及其應(yīng)用在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202111356220.4 | 申請(qǐng)日： | 2021-11-16 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN116135967A | 公開(kāi)（公告）日： | 2023-05-19 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 譚華榮;劉翔;張集慧;孫慧瑩;李金娥 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 中國(guó)科學(xué)院微生物研究所 |
| 主分類(lèi)號(hào)： | C12N1/21 | 分類(lèi)號(hào)： | C12N1/21;C12N15/54;C12N15/76;C12N15/65;C07D491/107;C12R1/19;C12R1/465 |
| 代理公司： | 中科專(zhuān)利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 11021 | 代理人： | 喬獻(xiàn)麗;張瑩 |
| 地址： | 100101 北*** | 國(guó)省代碼： | 北京;11 |
| 權(quán)利要求書(shū)： | 查看更多 | 說(shuō)明書(shū)： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 篩選 提高 霉素 化合物 產(chǎn)量 培養(yǎng) 體系 方法 及其 應(yīng)用 | ||
1.篩選提高惡唑霉素類(lèi)化合物產(chǎn)量的共培養(yǎng)體系的方法，其特征在于，所述方法采用的基礎(chǔ)菌為鏈霉菌A，所述方法包括以下步驟：
a.構(gòu)建鏈霉菌A報(bào)告菌株，所述鏈霉菌A報(bào)告菌株包含報(bào)告基因AHL信號(hào)分子合酶基因cviI；
b.用AHL指示菌篩選與鏈霉菌A報(bào)告菌株共培養(yǎng)后，鏈霉菌A報(bào)告菌株目的基因表達(dá)增加的共培養(yǎng)菌。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的篩選提高惡唑霉素類(lèi)化合物產(chǎn)量的共培養(yǎng)體系的方法，其特征在于，所述鏈霉菌A為龍勝鏈霉菌CGMCC?4.1101。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的篩選提高惡唑霉素類(lèi)化合物產(chǎn)量的共培養(yǎng)體系的方法，其特征在于，所述報(bào)告基因包含核糖體結(jié)合位點(diǎn)對(duì)應(yīng)DNA序列，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示，任選地，所述AHL指示菌為CV026。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的篩選提高惡唑霉素類(lèi)化合物產(chǎn)量的共培養(yǎng)體系的方法，其特征在于，所述目的基因?yàn)榻Y(jié)構(gòu)基因oxaG，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.5所示。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的篩選提高惡唑霉素類(lèi)化合物產(chǎn)量的共培養(yǎng)體系的方法，其特征在于，構(gòu)建鏈霉菌A報(bào)告菌株的方法包括以下步驟：
擴(kuò)增包含自身核糖體結(jié)合位點(diǎn)對(duì)應(yīng)序列的cviI(其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示)，擴(kuò)增包含自身啟動(dòng)子的卡那霉素抗性基因kanR1(其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.4所示)，擴(kuò)增結(jié)構(gòu)基因oxaG編碼區(qū)的上游同源臂(其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.19所示)，擴(kuò)增oxaG編碼區(qū)的下游同源臂(其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.22所示)，通過(guò)Gibson組裝的方式將所述oxaG編碼區(qū)的上游同源臂、cviI、kanR1、oxaG編碼區(qū)的下游同源臂按順序與EcoRV酶切的pKC1139質(zhì)粒連接，獲得重組質(zhì)粒pKDRoxaG，然后導(dǎo)入鏈霉菌A，篩選獲得鏈霉菌A報(bào)告菌株。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的篩選提高惡唑霉素類(lèi)化合物產(chǎn)量的共培養(yǎng)體系的方法，其特征在于，將微生物分別與鏈霉菌A報(bào)告菌株共培養(yǎng)，比較各體系中報(bào)告基因的表達(dá)量，篩選獲得提高惡唑霉素類(lèi)化合物產(chǎn)量的共培養(yǎng)體系。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的篩選提高惡唑霉素類(lèi)化合物產(chǎn)量的共培養(yǎng)體系的方法，其特征在于，與鏈霉菌A報(bào)告菌株共培養(yǎng)所用微生物是細(xì)菌或真菌。
8.提高惡唑霉素類(lèi)化合物產(chǎn)量的共培養(yǎng)體系，其特征在于，所述培養(yǎng)體系包括鏈霉菌和枯草芽孢桿菌。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的提高惡唑霉素類(lèi)化合物產(chǎn)量的共培養(yǎng)體系，其特征在于，所述鏈霉菌為龍勝鏈霉菌CGMCC?4.1101，所述枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌CGMCC?1.1630。
10.惡唑霉素類(lèi)化合物，其特征在于，所述惡唑霉素類(lèi)化合物結(jié)構(gòu)如下所示：
TOXA1(C36H51N3O10)：
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