[發明專利]一種CAR-NK細胞及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 202111356121.6
• 申請日: 2021-11-16
• 公開（公告）號: CN114250201A
• 公開（公告）日: 2022-03-29
• 發明（設計）人: 劉淑鵬;程忠平;劉琦;葛瑤
• 申請（專利權）人: 上海市第十人民醫院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C07K19/00;C12N15/867;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 上海領譽知識產權代理有限公司 31383
• 代理人: 王琰

本發明公開了一種CAR?NK細胞及其制備方法與應用，所述CAR?NK細胞為在NK細胞表面表達靶向間皮素的CAR，所述CAR的結構包括特異性靶向間皮素的抗原識別區；還包括以下(i)至(v)特征中的至少一種：(i)CD8胞外先導序列；(ii)來自CD8的鉸鏈；(iii)CD8/CD28跨膜區；(iv)胞內段共刺激信號41BB；(v)CD3ζ的胞漿信號傳導序列。本發明的CAR?NK細胞能夠有效靶向間皮素高表達的腫瘤細胞，其對高表達間皮素腫瘤有較好的靶向殺傷作用，且具有較高的特異性和安全性，為該類腫瘤患者提供新的免疫細胞治療藥物。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，具體涉及一種CAR-NK細胞及其制備方法與應用。

背景技術

嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor，CAR)是基于基因工程改造并表達于細胞表面的受體蛋白，由抗原識別區(single chain variable fragment，scFv)、鉸鏈區、跨膜區和胞內信號轉導區組成。通過病毒感染或電轉等方式使嵌合抗原受體表達在免疫細胞的表面從而構建成CAR-免疫細胞。CAR-T細胞治療是近年來興起的一種新的癌癥治療手段，也是當前抗腫瘤免疫治療中的研究熱點，通過基因工程方法改造免疫細胞，已成為腫瘤免疫細胞治療的趨勢。然而，CAR-T細胞在實體瘤治療中仍然存在諸多障礙，例如在CAR-T細胞治療安全性方面，在治療中常會發生脫靶效應和產生細胞因子風暴。

NK細胞作為天然免疫系統中重要的一員，同樣能夠通過CAR修飾增強其抗腫瘤能力的效應細胞。NK細胞與T細胞相比具有以下優點：第一，同種異體來源的CAR-NK移植物抗宿主病的風險降低，細胞因子釋放綜合征(Cytokine Release Syndrome，CRS)和神經毒性較少；第二，除了CAR靶向殺死腫瘤靶細胞外，還存在其他殺傷腫瘤方式，通過CAR依賴性和NK細胞受體依賴機制殺傷腫瘤，因此CAR修飾的NK細胞可能能夠有效地消除異質性；第三，同種異體NK細胞來源豐富，容易獲取，能夠大規模獲取NK細胞，使得CAR-NK細胞有機會大規則臨床使用，并且可以提供消除個性化的產品，解決困擾著當前的CAR-T細胞療法基于個體的自體免疫細胞治療產品處理起來比較復雜的難題。

但目前免疫CAR-NK細胞的開發和應用較少，因此，開發新型的CAR-NK細胞用于腫瘤等疾病的治療具有十分重要的意義。

發明內容

本發明旨在至少解決上述現有技術中存在的技術問題之一。為此，本發明提出一種CAR-NK細胞，能夠特異性靶向間皮素，有效治療腫瘤等疾病。

本發明還提出上述CAR-NK細胞的制備方法。

本發明還提出上述CAR-NK細胞的應用。

根據本發明的一個方面，提出了一種CAR-NK細胞，所述CAR-NK細胞為在NK細胞表面表達靶向間皮素的CAR，所述CAR的結構包括特異性靶向間皮素的抗原識別區；還包括以下(i)至(v)特征中的至少一種：(i)CD8胞外先導序列；(ii)來自CD8的鉸鏈；(iii)CD8/CD28跨膜區；(iv)胞內段共刺激信號41BB；(v)CD3ζ的胞漿信號傳導序列。

根據本發明的一種具體的實施方式，至少具有以下有益效果：本發明的CAR-NK細胞能夠有效靶向間皮素高表達的腫瘤細胞，其對高表達間皮素腫瘤有較好的靶向殺傷作用，且具有較高的特異性和安全性，為該類腫瘤患者提供新的免疫細胞治療藥物；該CAR-NK細胞能夠制備成“貨架式產品”，凍存于液氮罐，滿足患者隨時需要，減少等待時間。