[發明專利]一種CAR-NK細胞及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 202111356121.6
• 申請日: 2021-11-16
• 公開（公告）號: CN114250201A
• 公開（公告）日: 2022-03-29
• 發明（設計）人: 劉淑鵬;程忠平;劉琦;葛瑤
• 申請（專利權）人: 上海市第十人民醫院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C07K19/00;C12N15/867;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 上海領譽知識產權代理有限公司 31383
• 代理人: 王琰

1.一種CAR-NK細胞，其特征在于，所述CAR-NK細胞為在NK細胞表面表達靶向間皮素的CAR，所述CAR的結構包括特異性靶向間皮素的抗原識別區；

還包括以下(i)至(v)特征中的至少一種：

(i)CD8胞外先導序列；

(ii)來自CD8的鉸鏈；

(iii)CD8/CD28跨膜區；

(iv)胞內段共刺激信號41BB；

(v)CD3ζ的胞漿信號傳導序列。

2.根據權利要求1所述的CAR-NK細胞，其特征在于，所述CAR的結構包括如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。

3.根據權利要求1所述的CAR-NK細胞，其特征在于，所述CAR-NK細胞為臍帶血來源CAR-NK細胞。

4.權利要求1至3任一項所述的CAR-NK細胞的制備方法，其特征在于，所述CAR-NK細胞通過NK細胞轉染表達所述CAR的載體得到。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

S1、利用NK磁珠分離臍帶血中的NK細胞；

S2、將表達所述CAR的載體通過慢病毒感染激活NK細胞，添加IL-2用于激活；

S3、培養至約第14天收獲所述細胞CAR-NK細胞。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，還包括：使用重組人纖維蛋白片段包被非TC處理的細胞培養板和/或使用包含IL-2的SCGM培養基進行細胞培養。

7.根據權利要求4至6任一項所述的制備方法，其特征在于，所述載體包含表達所述CAR結構的核苷酸序列；還包括以下(a)至(c)特征中的至少一種：

(a)所述載體的骨架為慢病毒Lenti載體；

(b)Lenti-EF1α啟動子；

(c)所述CAR結構N端裝載表達flag的序列。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述載體包含如SEQ ID No.2所述的核苷酸序列。

9.權利要求1至3任一項所述的CAR-NK細胞在制備抗腫瘤藥物中的應用。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述抗腫瘤藥物為能夠治療靶向間皮素的腫瘤的藥物。