[發明專利]一種基于肽和抗體的疾病蛋白標志物的檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 202111346805.8
• 申請日: 2021-11-15
• 公開（公告）號: CN114019172B
• 公開（公告）日: 2022-08-16
• 發明（設計）人: 李燦鵬;趙卉;鄭凈
• 申請（專利權）人: 云南大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531;G01N33/543
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 薛紅凡

本發明提供了一種基于肽和抗體的疾病蛋白標志物的檢測試劑盒及其應用，屬于蛋白檢測技術領域。一種基于肽和抗體的疾病蛋白標志物的檢測試劑盒，包括以下組分：包被于固相載體的蛋白標志物抗體、肽的生物探針材料Pep/PtPd@ZrN@COF。根據檢測原理不同，分為基于電化學生物傳感器檢測和ELISA檢測。本發明提供的兩種生物傳感器都具有較低的成本、較高的靈敏度、較寬的檢測范圍、較低的檢出限和操作較方便等特點。

技術領域

本發明屬于蛋白檢測技術領域，具體涉及一種基于肽和抗體的疾病蛋白標志物的檢測試劑盒及其應用。

背景技術

對于很多常見重大疾病而言，早期診斷至關重要。近年來隨著免疫學、分子生物學和基因組學技術的發展，尋找和發現可靠的早期診斷生物標記物已經成為目前的一個研究熱點。目前在多種疾病中已經明確篩選得到多種早期診斷標志物。例如，英國謝菲爾德大學(University ofSheffield)的研究人員通過對超過19000篇與血液中癌癥生物標記物有關的研究的篩選，找出了 786種血液中與癌癥相關的生物標記物。這些生物標記物可能被用于開發針對大眾的早期癌癥篩選測試。阿爾茨海默病已成為大腦研究的焦點，血漿中包含有豐富的蛋白質、激素、RNA和炎性標志物等。有些蛋白質，比如許多參與炎性反應的蛋白質，都可以被鑒定作為阿爾茲海默氏癥的潛在診斷標志物。Aβ肽類被認為是阿爾茲海默氏癥檢測結果，且已經得到了大量研究。胰島素自身抗體對1型糖尿病而言是一種可靠的生物標志物。生物標志物 LRRK2在遺傳性帕金森病中發揮著作用。心型脂肪酸結合蛋白(H-FABP) 是早期確定和排除急性心肌梗死(AMI)的重要依據，同時心肌肌鈣蛋白 (cTnI)是檢測急性心肌梗死的黃金標志物。

目前，疾病的生物標記物根據檢測方法的差異進行了分類，比如微小 RNA和游離DNA可以通過PCR或者測序的方式檢測到，而蛋白類的生物標記物則需要電化學發光、表面等離振子共振、引導模式共振、微流控技術、免疫測試(ELISA等)或者質譜(MassSpectroscopy)的方式來檢測。這些技術大多數都依賴于大型儀器，這些儀器昂貴、靈敏度低且耗時。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種基于肽和抗體的疾病蛋白標志物的檢測試劑盒及其應用，具有檢測靈敏度高、檢測成本低的特點。

本發明提供了一種基于肽和抗體的疾病蛋白標志物的檢測試劑盒，包括以下組分：

包被于固相載體的蛋白標志物抗體、肽的生物探針材料 Pep/PtPd@ZrN@COF。

優選的，基于ELISA檢測原理，所述包被于固相載體的蛋白標志物抗體中固相載體為微孔板。

優選的，所述肽的生物探針材料Pep/PtPd@ZrN@COF的制備方法，包括以下步驟：

1)將ZrCl₄和尿素絡合，得到溶膠在惰性氣體下600～1000℃下煅燒鈍化，得到ZrNNPs；

2)將三(四苯甲醛基)磷、對苯二胺、步驟1)中所述ZrN NPs、1，4-二惡烷和均三甲苯混合，在乙酸作用下，經完全脫氣，在100～180℃下反應，得到ZrN@COF；

3)在水合肼催化作用下，將PdCl₂、Na₂PtCl₄、PVP進行反應，獲得的鉑鈀納米花溶液PtPd ANFs和步驟2)中所述ZrN@COF混合，得到 PtPd@ZrN@COF；

4)將步驟3)中所述PtPd@ZrN@COF的分散液結合蛋白標志物特異性肽，得到Pep/PtPd@ZrN@COF。

優選的，基于電化學生物傳感器檢測原理，所述包被于固相載體的蛋白標志物抗體中固相載體為金納米粒子負載的聚苯胺包覆的氧化鈰 Au@PDA@BCN復合物電極。