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[發明專利]一種用于研究自身免疫性肝炎的細胞模型的建立方法在審

專利信息
申請號: 202111346651.2 申請日: 2021-11-15
公開(公告)號: CN114149959A 公開(公告)日: 2022-03-08
發明(設計)人: 劉楊;郝慧琴;李振城;侯藝文;侯鐵錚 申請(專利權)人: 山西中醫藥大學
主分類號: C12N5/071 分類號: C12N5/071;C12N5/0786
代理公司: 太原申立德知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 14115 代理人: 程園園
地址: 030619 山西*** 國省代碼: 山西;14
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 一種 用于 研究 自身免疫 性肝炎 細胞 模型 建立 方法
【說明書】:

發明屬于醫學實驗模型研究技術領域,針對目前自身免疫性肝炎的嚴重性以及細胞模型對自身免疫性肝炎研究的重要性,公開了一種用于研究自身免疫性肝炎的細胞模型的建立方法。通過采用刀豆蛋白A誘導小鼠巨噬細胞樣細胞系RAW 264.7巨噬細胞株,并將RAW 264.7巨噬細胞株與BRL3a小鼠肝細胞共培養,在體外模擬自身免疫性肝炎發病過程中巨噬細胞對肝細胞造成炎性損傷的過程,建立了巨噬細胞/肝細胞共培養模型。彌補了自身免疫性肝炎細胞模型研究的空白,將自身免疫性肝炎的發病過程進行分解,聚焦巨噬細胞誘導肝細胞損傷的機制,有助于自身免疫性肝炎發病機制研究,以及治療藥物的篩選。

技術領域

本發明屬于醫學實驗模型研究技術領域,具體為一種用于研究自身免疫性肝炎的細胞模型的建立方法。

背景技術

自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)系由異常自身免疫反應所介導的肝實質炎性病變,可引發肝硬化及肝衰竭,全球總患病率介于4.0-42.9例/10萬人·年,不同膚色及年齡段人群均可罹患。AIH患者的10年累積死亡率為正常人群的2.29倍(32.3%vs14.1%);若合并肝硬化或門脈高壓,患者的死亡風險顯著升高。重癥AIH患者需進行肝移植以維持生命。據報道,1995年至2014年間,美國和英國進行肝移植的AIH患者占全部肝移植患者的3.2%和3.6%。因此,AIH被認為是除病毒性肝炎外,又一種嚴重危害人類健康的肝臟炎性疾病。本病的病因以及發病機制尚不清楚,目前認為是由于遺傳易感性及環境誘發因素等共同作用引起的自身免疫耐受缺失,從而誘導產生以T細胞和巨噬細胞介導為主的針對肝臟抗原的免疫反應,造成肝臟組織的破壞及炎癥的形成。

設計和建立符合人類發病過程的實驗模型(包括用于在體內研究的動物模型和用于體外研究的細胞模型)是深入研究自身免疫性肝炎發病機制的基礎。自身免疫性肝炎動物模型的相關研究持續了近半個世紀,已有部分動物模型得到了學界的公認。但由于自身免疫性肝炎的免疫炎性反應主要發生在肝臟,肝臟免疫微環境較為復雜,誘發自身免疫性肝炎的因素眾多。對本病發病機制的研究仍需在細胞水平進行深入探討,如研究某一個基因參與自身免疫性肝炎發病過程的機制,需對該基因進行沉默或過表達,通過回復實驗,以證實該基因是否參與本病的發生發展;又如,探討某種藥物是否對自身免疫性肝炎肝損傷具有調控作用時,有必要探討該藥的作用靶點,同樣需要體外細胞實驗數據的支持。

研究發現,在自身免疫性肝炎發病過程中,巨噬細胞除可作為抗原呈遞細胞參與誘導T細胞活化外,還可直接參與肝臟炎性損傷過程。因此,如果能夠建立一種穩定的、易于復建且符合自身免疫性肝炎發病過程的“通過誘導巨噬細胞活化從而介導肝細胞損傷”的細胞模型,將大大地推進自身免疫性肝炎發病機制的研究進程。

發明內容

針對目前自身免疫性肝炎的嚴重性以及細胞模型對自身免疫性肝炎研究的重要性,本發明提供了一種用于研究自身免疫性肝炎的細胞模型的建立方法。

為了達到上述目的,本發明采用了下列技術方案:

一種用于研究自身免疫性肝炎的細胞模型的建立方法,包括以下步驟:

步驟1,巨噬細胞的誘導活化;

步驟2,建立巨噬細胞和肝細胞共培養模型。

進一步,所述巨噬細胞為小鼠RAW 264.7巨噬細胞,肝細胞為小鼠BRL3a肝細胞。

進一步,所述巨噬細胞和肝細胞共培養細胞模型包括巨噬細胞和肝細胞間接共培養細胞模型、巨噬細胞和肝細胞直接共培養細胞模型。

進一步,所述步驟1中巨噬細胞通過刀豆蛋白A誘導活化。

更進一步,所述通過刀豆蛋白A誘導活化巨噬細胞的具體過程為:24孔板按照每孔1×106/個RAW 264.7巨噬細胞進行細胞接種,每孔加入800μL高糖DMEM培養基后,分別加入0-320μg/mL的異硫氰酸熒光素標記的刀豆蛋白A在37℃下誘導巨噬細胞0-24h。

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