[發明專利]一種用于研究自身免疫性肝炎的細胞模型的建立方法

在審

• 申請號: 202111346651.2
• 申請日: 2021-11-15
• 公開（公告）號: CN114149959A
• 公開（公告）日: 2022-03-08
• 發明（設計）人: 劉楊;郝慧琴;李振城;侯藝文;侯鐵錚
• 申請（專利權）人: 山西中醫藥大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N5/0786
• 代理公司: 太原申立德知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 14115
• 代理人: 程園園

1.一種用于研究自身免疫性肝炎的細胞模型的建立方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1，巨噬細胞的誘導活化；

步驟2，建立巨噬細胞和肝細胞共培養模型。

2.根據權利要求1所述的用于研究自身免疫性肝炎的細胞模型的建立方法，其特征在于：所述巨噬細胞為小鼠RAW 264.7巨噬細胞，肝細胞為小鼠BRL3a肝細胞。

3.根據權利要求1所述的用于研究自身免疫性肝炎的細胞模型的建立方法，其特征在于：所述巨噬細胞和肝細胞共培養細胞模型包括巨噬細胞和肝細胞間接共培養細胞模型、巨噬細胞和肝細胞直接共培養細胞模型。

4.根據權利要求1所述的用于研究自身免疫性肝炎的細胞模型的建立方法，其特征在于：所述步驟1中巨噬細胞通過刀豆蛋白A誘導活化。

5.根據權利要求4所述的用于研究自身免疫性肝炎的細胞模型的建立方法，其特征在于，所述通過刀豆蛋白A誘導活化巨噬細胞的具體過程為：24孔板按照每孔1×10⁶/個RAW264.7巨噬細胞進行細胞接種，每孔加入800μL高糖DMEM培養基后，分別加入0-320μg/mL的異硫氰酸熒光素標記的刀豆蛋白A在37℃下誘導巨噬細胞0-24h。

6.根據權利要求5所述的用于研究自身免疫性肝炎的細胞模型的建立方法，其特征在于：所述用異硫氰酸熒光素標記的刀豆蛋白A誘導巨噬細胞的最佳濃度為160μg/mL，最佳時間為12h。

7.根據權利要求3所述的用于研究自身免疫性肝炎的細胞模型的建立方法，其特征在于，所述巨噬細胞和肝細胞間接共培養細胞模型建立的具體方法為：將RAW264.7巨噬細胞以2×10⁵的密度接種到LABSELECT Transwell小室的上室，BRL3a肝細胞以2×10⁵的密度接種到Transwell小室的下室，然后將Transwell小室在37℃和5％CO₂孵箱孵育過夜或孵育12h，將160μg/mL的異硫氰酸熒光素標記的刀豆蛋白A加入Transwell小室的上室，誘導RAW264.7巨噬細胞12h。

8.根據權利要求3所述的用于研究自身免疫性肝炎的細胞模型的建立方法，其特征在于，所述巨噬細胞和肝細胞直接共培養細胞模型的具體方法為：先將BRL3a肝細胞以2.5×10⁵的密度接種到24孔板，在37℃和5％CO₂孵箱孵育6h；然后將RAW264.7巨噬細胞以2.5×10⁵的密度接種于同一培養孔內，與BRL3a肝細胞共同孵育，加入160μg/mL的異硫氰酸熒光素標記的刀豆蛋白A誘導12h。