[發(fā)明專利]牛體外受精胚胎玻璃化冷凍方法

有效

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• 申請日: 2021-11-15
• 公開（公告）號: CN113767896B
• 公開（公告）日: 2022-02-08
• 發(fā)明（設計）人: 王娜;趙明禮;郝少強;陳建美;郭春明
• 申請（專利權）人: 天津博裕力牧科技有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及牛體外受精胚胎玻璃化冷凍方法。具體地說，本發(fā)明方法包括如下步驟：(1)提供玻璃化冷凍液、冷凍預處理液、解凍液、冷凍管；(2)通過冷凍管抽吸端施力，從冷凍管入口一端，依次向管內(nèi)吸入：解凍液、空氣、玻璃化冷凍液、空氣、包含胚胎的玻璃化冷凍液、空氣、解凍液；(3)分別在上端的解凍液上部、下端的解凍液下部封口，使步驟(2)吸入的七段密封于冷凍管內(nèi)，接著將冷凍管置液氮中冷凍。本發(fā)明方法呈現(xiàn)如說明書所述優(yōu)良效果。

技術領域

本發(fā)明屬于動物繁殖技術領域，涉及一種用于農(nóng)業(yè)-畜牧獸醫(yī)繁殖的技術，具體涉及一種牛體外受精的方法，另外，本發(fā)明還涉及牛體外受精中使用的相關工作試液在牛體外受精中的應用，尤其是，涉及一種具有優(yōu)良效果的牛體外受精胚胎玻璃化冷凍方法。本發(fā)明牛體外受精胚胎玻璃化冷凍方法具有優(yōu)異的技術效果。

背景技術

體外受精(In Vitro Fertilization)是指哺乳動物的精子和卵子在體外人工控制的環(huán)境中完成受精過程的技術，英文簡稱為IVF。由于它與胚胎移植技術(ET)密不可分，又簡稱為IVF-ET。在生物學中，把體外受精胚胎移植到母體后獲得的動物稱試管動物(test-tube animal)。這項技術成功于20世紀50年代，在最近20年發(fā)展迅速，現(xiàn)已日趨成熟而成為一項重要而常規(guī)的動物繁殖生物技術。

體外受精技術對動物生殖機理研究、畜牧生產(chǎn)、醫(yī)學和瀕危動物保護等具有重要意義。如用小鼠、大鼠或家兔等作實驗材料，體外受精技術可用于研究哺乳動物配子發(fā)生、受精和胚胎早期發(fā)育機理。在家畜品種改良中，體外受精技術為胚胎生產(chǎn)提供了廉價而高效的手段，對充分利用優(yōu)良品種資源，縮短家畜繁殖周期，加快品種改良速度等有重要價值。在人類，IVF-ET技術是治療某些不孕癥和克服性連鎖病的重要措施之一。體外受精技術還是哺乳動物胚胎移植、克隆、轉(zhuǎn)基因和性別控制等現(xiàn)代生物技術不可缺少的組成部分。

隨著現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技的發(fā)展，為了更充分利用良種母牛的繁殖潛力，加速遺傳育種進程，在生產(chǎn)實踐中應用高效的繁殖新技術成為必然。活體采卵(Ovum pick UP，OPU)和體外受精技術(In Vitro Fertilization，IVF)是二十世紀八十年代快速發(fā)展起來的胚胎工程新技術，二者相結合可獲得大量遺傳系譜明確的胚胎，從而縮短世代間隔。目前，這兩種技術已經(jīng)成為歐美和大洋洲等畜牧業(yè)發(fā)達國家的農(nóng)場主為擴大良種母牛群而采用的重要繁殖技術。然而，采用常規(guī)的牛胚胎培養(yǎng)體系(CR1aa和SOF液)，牛體外受精的囊胚發(fā)育率較低，而且胚胎質(zhì)量也遠不及體內(nèi)胚胎，導致胚胎移植受體后的妊娠率低，因此如何提高囊胚發(fā)育率及胚胎質(zhì)量成為體外受精胚胎生產(chǎn)的重點和研究的焦點。

早在1878年，德國人Scnenk就以家兔和豚鼠為材料，開始探索哺乳動物的體外受精技術。但直到1951年，美籍華人張民覺和Austin分別發(fā)現(xiàn)精子體外獲能現(xiàn)象后，體外受精技術才獲得了突破性進展。牛體外受精技術受到卵母細胞的體外成熟、精子的體外獲能、受精卵的體外培養(yǎng)環(huán)境等多個方面的影響。