[發(fā)明專利]牛體外受精胚胎玻璃化冷凍方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111345436.0
• 申請(qǐng)日: 2021-11-15
• 公開（公告）號(hào): CN113767896B
• 公開（公告）日: 2022-02-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王娜;趙明禮;郝少?gòu)?qiáng);陳建美;郭春明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津博裕力牧科技有限公司
• 主分類號(hào): A01N1/02
• 分類號(hào): A01N1/02
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.牛體外受精胚胎玻璃化冷凍方法，其包括如下步驟：

(1)提供玻璃化冷凍液、冷凍預(yù)處理液、解凍液、冷凍管；

(2)通過(guò)冷凍管抽吸端施力，從冷凍管入口一端，依次向管內(nèi)吸入：解凍液6~8cm、空氣0.5~1cm、玻璃化冷凍液0.4~0.6cm、空氣0.5~1cm、包含胚胎的玻璃化冷凍液0.4~0.6cm、空氣0.5~1cm、解凍液0.5~1cm；

(3)分別在上端的解凍液上部、下端的解凍液下部封口，使步驟(2)吸入的七段密封于冷凍管內(nèi)，接著將冷凍管置液氮中冷凍，

其特征是：

所述玻璃化冷凍液為增補(bǔ)添加了油酸鈉和酒石酸鈉的EFS30，其中油酸鈉的濃度為0.02~0.04mg/ml，酒石酸鈉的濃度為0.1~0.2mg/ml；

所述解凍液是用Dulbecco’s磷酸鹽緩沖液為基礎(chǔ)液配制成含0.5mol/L蔗糖的溶液；

冷凍管兩端封口后，解凍液總長(zhǎng)度與冷凍液總長(zhǎng)度之比為5~10；

所述冷凍管為聚丙烯材質(zhì)的冷凍管，其具有1~5mm的內(nèi)徑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，冷凍管兩端封口后，解凍液總長(zhǎng)度與冷凍液總長(zhǎng)度之比為5~8。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，冷凍管兩端封口后，解凍液總長(zhǎng)度與冷凍液總長(zhǎng)度之比6。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，所述冷凍管具有1~4mm的內(nèi)徑。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，所述冷凍管具有1~3mm的內(nèi)徑。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，所述冷凍管具有2mm的內(nèi)徑。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，所述冷凍管的抽吸端膨大。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，油酸鈉的濃度為0.02~0.03mg/ml，酒石酸鈉的濃度為0.1~0.15mg/ml。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，油酸鈉的濃度為0.025mg/ml，酒石酸鈉的濃度為0.125mg/ml。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，所述包含胚胎的玻璃化冷凍液是如下方式制備的：挑選體外培養(yǎng)合格的胚胎，置10%乙二醇溶液中預(yù)處理5~10秒后，轉(zhuǎn)移至玻璃化冷凍液中，即得。