[發明專利]一種基于有機酸評價半夏和鷂落坪半夏品質的方法

在審

• 申請號: 202111344860.3
• 申請日: 2021-11-12
• 公開（公告）號: CN114062570A
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發明（設計）人: 歐祖蘭;焦春燕;王占軍;朱小茜;陳倩穎;徐忠東
• 申請（專利權）人: 合肥師范學院
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 南京申云知識產權代理事務所(普通合伙) 32274
• 代理人: 邱興天

本發明公開了一種基于有機酸評價半夏和鷂落坪半夏品質的方法，屬于中藥化學成分分析領域。本發明利用75％乙醇加熱回流提取半夏和鷂落坪半夏塊莖總有機酸成分，并以乙酸乙酯反復萃取，去除雜質，獲得有機酸提取液。采用UPLC?MS/MS對提取液進行檢測，通過標準物質數據庫對有機酸成分進行定性分析，共鑒定出109種有機酸成分，采用三重四級桿質譜的多反應檢測模式MRM進行定量檢測，結合大于2倍或小于0.5倍的差異倍數，篩選出91種含量存在顯著差異的有機酸成分。本發明為利用有機酸評價半夏和鷂落坪半夏的品質提供了優良的技術手段，在半夏屬藥物質量控制和種類鑒定具有重要應用價值。

技術領域

本發明屬于中藥化學成分分析領域，更具體地說，涉及一種基于有機酸評價半夏和鷂落坪半夏品質的方法。

背景技術

半夏(Pinellia ternate)為天南星科(Araceae)半夏屬(Pinellia)多年生草本植物，主要分布于湖北、河南、安徽、山東、四川等地；以塊莖入藥，具有鎮咳、祛痰、止吐、鎮靜、催眠、抗腫瘤等功效，是我國常用的大宗藥材。鷂落坪半夏(Pinelliayaoluopingensis)是安徽鷂落坪國家級自然保護區的特有種，與半夏具有相似的功效，但藥效作用要快于半夏，可能與其化學成分有關。

研究表明，有機酸是半夏重要的化學成分，主要為琥珀酸、草酸、蘋果酸、烏頭酸、甲酸、乙酸等，且與鎮咳祛痰作用具有相關性。2015版《中國藥典》中記錄了半夏有機酸含量測定采用的是電位滴定法，以琥珀酸含量計算，進行質量控制；但該方法只能粗略反映半夏有機酸成分的含量，無法分析有機酸成分的種類。現有技術中，翟興英等利用超高效液相色譜-飛行時間質譜法(UPLC-Q-TOF-MS/MS)對半夏化學成分進行了種類分析，但未針對半夏有機酸成分進行提取和分離檢測，因此鑒定到的有機酸種類較少。目前，關于鷂落坪半夏有機酸成分的研究鮮見報道。

因此，需要對半夏和鷂落坪半夏有機酸成分的提取和測定方法進行優化，深入比較半夏和鷂落坪半夏有機酸種類和含量差異，為半夏屬質量控制和種類鑒定提供參考。

發明內容

針對現有技術存在的上述問題，本發明所要解決的技術問題在于提供一種基于有機酸評價半夏和鷂落坪半夏品質的方法，具體是采用UPLC-MS/MS(Ultra PerformanceLiquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry)檢測半夏與鷂落坪半夏中的有機酸成分及含量，用于半夏與鷂落坪半夏品質的評價和比較。

為了解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案如下：

一種基于有機酸評價半夏和鷂落坪半夏品質的方法，包括以下步驟：

(1)將待測樣品殺青烘烤至恒重，并研磨過篩，收集粉末，所述待測樣品為半夏塊莖或鷂落坪半夏塊莖；

(2)將步驟(1)所得粉末與乙醇溶液混合，進行熱回流提取，并進行減壓濃縮，得到有機酸粗提液；

(3)將步驟(2)中獲得的有機酸粗提液用無水碳酸鈉水溶液調節pH值至10～12，用乙酸乙酯反復萃取至萃取液無色，合并萃取液；

(4)將步驟(3)所得萃取液用鹽酸酸化至pH值2～3，再以乙酸乙酯反復萃取，合并萃取液；

(5)將步驟(4)所得萃取液減壓蒸干后，用乙醇溶液復溶，得到總游離有機酸待測樣品；

(6)用超高效液相色譜-串聯質譜檢測所述總游離有機酸待測樣品(包括質控樣本QC)，并用標準物質數據庫和三重四級桿質譜的多反應檢測模式MRM(Multiple ReactionMonitoring)，對總游離有機酸待測樣品的成分分別進行定性和定量分析；

(7)基于步驟(6)中定性和定量分析的結果，獲得總游離有機酸的具體成分及其在半夏和鷂落坪半夏中含量的差異。