[發明專利]一種表達狂犬病毒g蛋白的重組乳酸菌、構建方法及應用在審
| 申請號: | 202111336759.3 | 申請日: | 2021-11-12 |
| 公開(公告)號: | CN114085860A | 公開(公告)日: | 2022-02-25 |
| 發明(設計)人: | 崔曉辰;馬鳳龍;曹雷;李光偉;鄭建楠;申識川;邢洪強 | 申請(專利權)人: | 青島國脈生物科技有限公司 |
| 主分類號: | C12N15/74 | 分類號: | C12N15/74;C12N1/21;C12N15/56;C12N9/00;A61K39/205;A61P31/14 |
| 代理公司: | 暫無信息 | 代理人: | 暫無信息 |
| 地址: | 266000 山東省*** | 國省代碼: | 山東;37 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 表達 狂犬病毒 蛋白 重組 乳酸菌 構建 方法 應用 | ||
1.一種狂犬病毒G蛋白重組表達載體,其特征在于,所述該重組表達載體的可表達基因中至少包含有狂犬病毒G蛋白基因。
2.根據權利要求1所述的一種狂犬病毒G蛋白重組表達載體,其特征在于:
該重組表達載體的可表達基因中還包含有pgsA基因。
3.根據權利要求2所述狂犬病毒G蛋白重組表達載體,其特征在于:
狂犬病毒G蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2;
pgsA基因的核苷酸序列如SEQ ID No.3。
4.根據權利要求1所述的一種狂犬病毒G蛋白重組表達載體,其特征在于:
該重組表達載體采用不含抗性基因篩選標記的重組表達載體。
5.根據權利要求4所述的一種狂犬病毒G蛋白重組表達載體,其特征在于:不含抗性基因篩選標記的重組表達載體為經過改造不含有紅霉素抗性基因的pMG36e載體;
不含有紅霉素抗性基因的pMG36e載體的改造方法:
步驟(1)以嗜酸乳桿菌總RNA為模板,設計含有酶切位點的特異性引物,克隆β-半乳糖甘酶基因lacZ;
步驟(1)中,含有酶切位點的特異性引物:
P1:5'-GCGAATTCTAGAGGAAATAAAATGACACAATTATCACG-3';
P2:5'-AAAAGAATTCCTAATTTCTCAATACTTGAACATCC-3';
步驟(2)根據pMG36e載體序列設計含有酶切位點的特異性引物,擴增除紅霉素抗性基因以外的片段;
步驟(2)中,含有酶切位點的特異性引物:
P3:5-TACGTCGATCGAATTCGGTCCT-3';
P4:5'-CGCGAATTCATGCATAAACTGCATCCCTTA-3';
步驟(3)將步驟(1)克隆獲得的β-半乳糖甘酶基因lacZ基因片段與步驟(2)克隆的除紅霉素抗性基因以外的片段進行酶切后,連接,即得改造后的不含有紅霉素抗性基因的pMG36e載體。
6.一種表達狂犬病毒G蛋白的重組乳酸菌,其特征在于:所述該重組菌是由權利要求1~5任一所述的一種狂犬病毒G蛋白重組表達載體轉化導入到乳酸菌中所得能夠表達狂犬病毒G蛋白的重組乳酸菌。
7.根據權利要求6所述的一種表達狂犬病毒G蛋白的重組乳酸菌,其特征在于:所述轉化導入到的乳酸菌采用乳酸乳球菌MG1363;所述所得能夠表達狂犬病毒G蛋白的重組乳酸菌Lactococcus lactis gm21,保藏編號為CCTCC N0.M 20211054。
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