[發明專利]缺失十二個基因的減毒非洲豬瘟病毒株的構建及其作為疫苗的應用

有效

• 申請號: 202111335696.X
• 申請日: 2021-11-11
• 公開（公告）號: CN114107228B
• 公開（公告）日: 2023-06-13
• 發明（設計）人: 鄭海學;馮濤;李攀;劉華南;石正旺;馬昭;申超超;齊曉蘭;吳盼雪;張克山;李丹;黨文;楊波;王琦;曹麗艷;朱紫祥;田宏;郭建宏;劉湘濤
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/34;A61K39/12;A61P31/20
• 代理公司: 北京力量專利代理事務所(特殊普通合伙) 11504
• 代理人: 毛婷

1.通過在II型非洲豬瘟病毒株ASFV?CN/GS?2018中聯合缺失基因片段制備減毒非洲豬瘟病毒株的應用，其特征在于，所述基因片段為II型非洲豬瘟病毒株ASFV?CN/GS?2018全長序列的第11627-12499位和第24164-35631位；所述II型非洲豬瘟病毒株ASFV?CN/GS?2018保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO：V202096。

2.通過在II型非洲豬瘟病毒株ASFV?CN/GS?2018中聯合缺失基因片段制備非洲豬瘟疫苗的應用，其特征在于，所述基因片段為II型非洲豬瘟病毒株ASFV?CN/GS?2018全長序列的第11627-12499位和第24164-35631位；所述II型非洲豬瘟病毒株ASFV?CN/GS?2018保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO：V202096。

3.一種基因缺失減毒非洲豬瘟病毒株，其特征在于，所述基因缺失減毒非洲豬瘟病毒株為基因片段缺失的II型非洲豬瘟病毒株ASFV?CN/GS?2018；所述基因片段為II型非洲豬瘟病毒株ASFV?CN/GS?2018全長序列的第11627-12499位和第24164-35631位；所述II型非洲豬瘟病毒株ASFV?CN/GS?2018保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO：V202096。

4.一種非洲豬瘟疫苗，其特征在于，所述非洲豬瘟疫苗包括權利要求3所述的基因缺失減毒非洲豬瘟病毒株。

5.一種制備權利要求3所述的基因缺失減毒非洲豬瘟病毒株的方法，其特征在于，所述的方法是通過基因工程手段將原始II型非洲豬瘟病毒株ASFV?CN/GS?2018全長序列的第11627-12499位和第24164-35631位序列缺失。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法為同源重組技術。

7.一種制備權利要求3所述基因缺失減毒非洲豬瘟病毒株的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

（1）設計MGF-360-9L基因上游序列和MGF-505-3R基因下游序列各1.0kb作為左右同源重組臂，將所述的左右同源重組臂基因與mCherry基因篩選表達盒基因片段p72-mCherrry-BGH?polyA同時克隆至pUC57載體，獲得重組質粒pM9-mCherry；

（2）設計MGF-110-9L基因上下游序列各1.0kb作為左右同源重組臂，將所述的左右同源重組臂與eGFP基因篩選表達盒基因片段p72-eGFP-SV40polyA同時克隆至pUC57載體，獲得重組質粒p20-eGFP；

（3）將重組質粒p20-eGFP和pM9-mCherry依次轉染至感染ASFV原始毒株的BMDM細胞，構建得到ASFVG-ACD-00190基因、MGF-110-9L基因、ASFVG-ACD-00210基因、MGF-360-9L基因、MGF-360-10L基因、MGF-360-11L基因、MGF-505-1R基因、MGF-360-12L基因、MGF-360-13L基因、MGF-360-14L基因、MGF-505-2R基因和MGF-505-3R聯合缺失的減毒非洲豬瘟病毒Δ20/M9。