[發(fā)明專利]一種阿佛曼鏈霉菌活性孢子的固體發(fā)酵工藝

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111326362.6
• 申請(qǐng)日: 2021-11-10
• 公開（公告）號(hào): CN114107097A
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 暴連群;劉中須;祁桂玲;候慧云;劉天嬌;王學(xué)偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河北興柏農(nóng)業(yè)科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N3/00;C12R1/465
• 代理公司: 北京德崇智捷知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11467
• 代理人: 郜彥茹

本發(fā)明涉及一種阿佛曼鏈霉菌活性孢子的固體發(fā)酵工藝，包括如下步驟：步驟1、阿佛曼鏈霉菌的菌種制備：將冷凍保藏的阿佛曼鏈霉菌菌種接種于茄子瓶斜面培養(yǎng)基上，于28?30攝氏度培養(yǎng)7天，備用；步驟2、固體發(fā)酵培養(yǎng)：步驟2?1、配制固體發(fā)酵培養(yǎng)基，并滅菌；步驟2?2、取步驟1制備的茄子瓶斜面菌種，用無(wú)菌水制成菌種懸浮液；步驟2?3、將菌種懸浮液均勻接種于步驟2?1制備的固體發(fā)酵培養(yǎng)基中；步驟2?4、在臥式固態(tài)生物反應(yīng)器進(jìn)行固體發(fā)酵培養(yǎng)，時(shí)間9?11天，至每克物料中活孢子數(shù)量大于等于50億個(gè)后，停止發(fā)酵。本發(fā)明能夠產(chǎn)出大量的阿佛曼鏈霉菌活性孢子，為阿佛曼鏈霉菌活性孢子的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于發(fā)酵生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種阿佛曼鏈霉菌活性孢子的固體發(fā)酵工藝。

背景技術(shù)

生物農(nóng)藥是指利用生物活體(真菌，細(xì)菌，昆蟲病毒，轉(zhuǎn)基因生物，天敵等)或其代謝產(chǎn)物(信息素，生長(zhǎng)素，萘乙酸，2，4-D等)針對(duì)農(nóng)業(yè)有害生物進(jìn)行殺滅或抑制的制劑。

而阿維菌素(Avermectins，AVM)，又稱阿佛曼菌素，是由阿維鏈霉菌(Streptomycesavermitilis)發(fā)酵產(chǎn)生的一組大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。其作為一種光譜殺蟲的綠色生物農(nóng)藥，自誕生以來(lái)深受人類青睞，得到了廣泛的應(yīng)用。但是在阿維菌素產(chǎn)業(yè)發(fā)展中，抗藥性逐年遞增、液態(tài)發(fā)酵下所產(chǎn)生的廢渣、廢水以及制造過(guò)程中大量有機(jī)溶劑的使用，對(duì)動(dòng)植物、土壤、生態(tài)環(huán)境，帶來(lái)較大危害等瓶頸問(wèn)題，成為制約生物農(nóng)藥產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的一個(gè)重要問(wèn)題。

而以活體微生物、活性代謝產(chǎn)物為有效成分創(chuàng)制安全高效的生物農(nóng)藥新品種，由于其具有綠色高效、低成本、低污染制造工藝等優(yōu)勢(shì)，逐漸成為未來(lái)生物農(nóng)藥發(fā)展研究方向，因此，平衡阿維菌素產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，開發(fā)一種阿佛曼鏈霉菌活性孢子的固體發(fā)酵工藝，以解決阿維菌素產(chǎn)業(yè)中帶來(lái)的一些列問(wèn)題，顯得至關(guān)重要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的的缺陷，提供了一種阿佛曼鏈霉菌活性孢子的固體發(fā)酵工藝，其綠色高效、制造成本低，制造工藝污染低。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案如下：

一種阿佛曼鏈霉菌活性孢子的固體發(fā)酵工藝，包括如下步驟：

步驟1、阿佛曼鏈霉菌的菌種制備：

將冷凍保藏的阿佛曼鏈霉菌菌種接種于茄子瓶斜面培養(yǎng)基上，于28-30攝氏度培養(yǎng)7天，備用；

步驟2、固體發(fā)酵培養(yǎng)：

步驟2-1、配制固體發(fā)酵培養(yǎng)基，并滅菌；

步驟2-2、取步驟1制備的茄子瓶斜面菌種，用無(wú)菌水制成菌種懸浮液；

步驟2-3、將菌種懸浮液均勻接種于步驟2-1制備的固體發(fā)酵培養(yǎng)基中；

步驟2-4、在臥式固態(tài)生物反應(yīng)器進(jìn)行固體發(fā)酵培養(yǎng)，時(shí)間9-11天，至每克物料中活孢子數(shù)量大于等于50億個(gè)后，停止發(fā)酵；固體發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為：無(wú)菌空氣通氣量1：0.2-0.5v/v/min(無(wú)菌空氣通氣量指的是培養(yǎng)基與每分鐘內(nèi)通入的無(wú)菌空氣的體積比)；反應(yīng)器壓力：0.005-0.01MPa，培養(yǎng)溫度28-30攝氏度，培養(yǎng)濕度50-60％。

進(jìn)一步的，所述阿佛曼鏈霉菌活性孢子的固體發(fā)酵工藝，還包括步驟3、活孢子粉的制備：

將步驟2發(fā)酵結(jié)束的固體培養(yǎng)物移入雙錐旋轉(zhuǎn)鼓風(fēng)式干燥機(jī)中干燥，至物料含水量小于等于10％后，粉碎成60-80目的粉末，即得阿佛曼活孢子粉。

進(jìn)一步的，所述茄子瓶斜面培養(yǎng)基，包括如下質(zhì)量百分比的各原料：牛肉膏0.3％，蛋白胨0.5％，葡萄糖0.5％，磷酸二氫鉀0.05％，硫酸鎂0.03％，瓊脂1.8-2.2％，水100mL，pH6.5-7.0。