[發明專利]一種發酵培養基及發酵生產多殺菌素的方法

在審

• 申請號: 202111326345.2
• 申請日: 2021-11-10
• 公開（公告）號: CN114015604A
• 公開（公告）日: 2022-02-08
• 發明（設計）人: 祁桂玲;程曦;王學偉;范令濤;楊柳
• 申請（專利權）人: 河北興柏農業科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/38;C12P19/62;C12R1/01
• 代理公司: 北京德崇智捷知識產權代理有限公司 11467
• 代理人: 郜彥茹

1.一種多殺菌素發酵培養基，其特征在于，包括發酵基礎培養基，發酵補料培養基一，發酵補料培養基二；

所述發酵基礎培養基中，包括以下原料：葡萄糖7.5-8％，棉籽粉2.5-3％，酵母膏0.5-1％，玉米漿0.5-1％，蛋白胨0.5-1％，磷酸二氫鉀0.2-0.4％，碳酸鈣0.2-0.3％，硫酸銨0.5-1％，硫酸錳0.0002-0.0005％，鉬酸鈉0.0002-0.0005％，硫酸亞鐵0.0001-0.0002，大豆油0.5-1％，消沫劑0.015-0.03％；水余量，PH調至7.2-7.4；

所述發酵補料培養基一中，包括以下原料：玉米漿30％、磷酸二氫鉀2％、氯化鈉2％，水余量；

所述發酵補料培養基二中，包括以下原料：葡萄糖65％，磷酸二氫鉀0.5％，水余量。

2.根據權利要求1所述的一種多殺菌素發酵培養基，其特征在于，

所述發酵基礎培養基的滅菌方法為：121-123℃溫度滅菌30min；

所述發酵補料培養基一的滅菌方法為：121-123℃溫度滅菌30min；

所述發酵補料培養基二的滅菌方法為：115-120℃溫度滅菌20-25min。

3.一種利用如權利要求1或2所述發酵培養基發酵生產多殺菌素的方法，其特征在于，包括如下步驟：

首先將滅菌后的發酵基礎培養基調節pH為7.0-7.3；然后將種子培養液按10％-15％的接種量接種于發酵基礎培養基中，發酵培養250-320h，即可。

4.根據權利要求3所述的發酵生產多殺菌素的方法，其特征在于，發酵培養時，發酵溫度為28-30℃。

5.根據權利要求3所述的發酵生產多殺菌素的方法，其特征在于，

發酵培養時，發酵液溶氧水平為：菌體處于遲滯期和對數生長期時，控制發酵液溶氧水平大于等于50％；

菌體進入生產期后，控制發酵液溶氧水平35-50％。

6.根據權利要求3所述的發酵生產多殺菌素的方法，其特征在于，

發酵培養時，當菌體進入生產期后，通過補入pH調節劑的方式控制發酵液pH為6.0-7.0。

7.根據權利要求3所述的發酵生產多殺菌素的方法，其特征在于，

發酵培養中，當發酵時間達到85-90h和185-190h時，分別補入發酵補料培養基一；所述發酵補料培養基一的補料體積為運行體積的1.5-2.0％。

8.根據權利要求3所述的發酵生產多殺菌素的方法，其特征在于，

發酵培養中，當發酵液殘糖水平2.0％時，每24h補入一次發酵補料培養基二，當發酵液運行中生物量有開始下降趨勢或者通過補料后殘糖消耗速度減慢時，即可停止補料；所述發酵補料培養基二的補料體積＝(2％-當天檢測殘糖含量％)*發酵液體積/發酵補料培養基二中葡萄糖的濃度。

9.根據權利要求3所述的發酵生產多殺菌素的方法，其特征在于，發酵培養過程中，每24小時取樣檢測發酵液的PH、生物量、殘糖、氨基氮；40小時后開始每24h取樣檢測產物多殺菌素的濃度。

10.根據權利要求3所述的發酵生產多殺菌素的方法，其特征在于，

所述種子培養液由活化后的刺糖多胞菌進行種子罐培養獲得，所述種子培養液中菌體的生物量大于等于16％。