[發(fā)明專利]聯(lián)合表達(dá)CCR2b和CD40L的工程化免疫細(xì)胞及其制備和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111322947.0
• 申請日: 2021-11-10
• 公開（公告）號: CN113755448B
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張曦;黃智宏;韓德平;燕妮;王調(diào)霞;朱曉娜;王寧;林偉雄;盧永
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州百吉生物制藥有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/62;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 上海一平知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 徐迅;崔佳佳

本發(fā)明提供了聯(lián)合表達(dá)CCR2b和CD40L的工程化免疫細(xì)胞及其制備和應(yīng)用。本發(fā)明將含有NKG2D胞外域的CAR分子與CCR2b及CD40L同時(shí)聯(lián)合表達(dá)于CAR?T細(xì)胞中，因此既能通過CCR2b提高CAR?T細(xì)胞對趨化因子的靈敏度及其向?qū)嶓w瘤病灶的遷移能力；也能通過CD40L激活機(jī)體內(nèi)源的天然和適應(yīng)性免疫應(yīng)答，提高腫瘤治療效果并降低復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)；還能通過NKG2D CAR分子識別惡性實(shí)體瘤細(xì)胞表面的多種靶點(diǎn)抗原，降低因腫瘤異質(zhì)性或靶點(diǎn)抗原丟失而導(dǎo)致療效下降的風(fēng)險(xiǎn)，從而提高腫瘤治療的效果。本發(fā)明的工程化免疫細(xì)胞，可協(xié)同地顯著提高針對腫瘤細(xì)胞的體外殺傷作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于腫瘤免疫和細(xì)胞治療領(lǐng)域，具體地，涉及一種聯(lián)合表達(dá)CCR2b和CD40L的工程化免疫細(xì)胞。

背景技術(shù)

細(xì)胞免疫治療是一種新興的、具有顯著療效的腫瘤治療模式，是一種自身免疫抗癌的新型治療方法。它是運(yùn)用生物技術(shù)和生物制劑對從病人體內(nèi)采集的免疫細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)、修飾改造和擴(kuò)增后回輸?shù)讲∪梭w內(nèi)的方法，以激發(fā)、增強(qiáng)機(jī)體自身免疫功能，從而達(dá)到治療腫瘤的目的。

T細(xì)胞是參與細(xì)胞免疫的一類重要的淋巴細(xì)胞，通過抗原呈遞細(xì)胞的信號傳遞，可以特異性地識別并殺傷腫瘤細(xì)胞。然而，腫瘤細(xì)胞也會(huì)通過減少或丟失抗原表位、免疫抑制作用、腫瘤異質(zhì)性(即同一種惡性腫瘤在不同患者個(gè)體間或者同一患者體內(nèi)不同部位腫瘤細(xì)胞間從基因型到表型上存在的差異)等方式阻礙T細(xì)胞的特異性識別，從而逃避機(jī)體的免疫應(yīng)答。

嵌合抗原受體T細(xì)胞(chimeric antigen receptor T cell, CAR-T)療法正是針對該問題應(yīng)運(yùn)而生的。具體來說，CAR分子是一種人為設(shè)計(jì)和構(gòu)建的受體分子，由信號肽、胞外抗原結(jié)合域、鉸鏈區(qū)、跨膜區(qū)、共刺激結(jié)構(gòu)域、胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域等部分組成。因此，CAR分子具有特異性識別腫瘤表面抗原、激活T細(xì)胞殺傷活性和刺激T細(xì)胞增殖等功能。通過采集培養(yǎng)腫瘤患者的T細(xì)胞并以人工方法轉(zhuǎn)導(dǎo)CAR分子的編碼基因，使患者自體的T細(xì)胞表達(dá)CAR分子。回輸至患者體內(nèi)后，T細(xì)胞可以通過CAR分子高效且特異性地識別并殺傷腫瘤細(xì)胞，達(dá)到癌癥治療的效果。

CAR-T療法的概念從1989年首次被首次提出以來，經(jīng)歷了三十年的發(fā)展及多輪的技術(shù)更迭(圖1)。第一代CAR-T僅有作為胞外抗原結(jié)合域的單鏈抗體和作為胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的CD3ζ，無法完全激活T細(xì)胞的活性，治療效果不佳。第二代CAR-T在第一代CAR-T的基礎(chǔ)上引入了一個(gè)共刺激結(jié)構(gòu)域，提高了T細(xì)胞的體外增殖能力和細(xì)胞因子釋放水平。第三代CAR-T在第二代CAR-T的基礎(chǔ)上，增加了一個(gè)共刺激結(jié)構(gòu)域，雖然可以提高T細(xì)胞的殺傷活性，但有可能誘發(fā)細(xì)胞因子的過量釋放。因此，新一代CAR-T在第二代CAR-T的基礎(chǔ)上聯(lián)合表達(dá)其他輔助因子，例如聯(lián)合表達(dá)IL-12或IL-2Rβ胞內(nèi)的STAT3/5結(jié)合結(jié)構(gòu)域等，有助于提高腫瘤殺傷活性和安全性等效果。

雖然在血液瘤中CAR-T治療獲得令人滿意的效果，但CAR-T對于實(shí)體瘤的治療效果仍有很大的提升空間。原因在于：(1)很多實(shí)體腫瘤都難以在早期被發(fā)現(xiàn)，具有惡性程度高、復(fù)發(fā)率高、預(yù)后差等特點(diǎn)。例如，83%的結(jié)直腸癌患者在首次確診時(shí)已處于中晚期，且44%的患者已經(jīng)出現(xiàn)了肝、肺等部位的轉(zhuǎn)移，近半數(shù)患者生存期不到5年；約70%的卵巢癌患者在確診時(shí)，癌細(xì)胞已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移，難以通過手術(shù)、化療、放療手段治愈，治療后的復(fù)發(fā)率仍高達(dá)70%以上；90%的胰腺癌患者被確診時(shí)已屬晚期，5年生存率僅7%。(2)在實(shí)體瘤治療過程中，腫瘤組織往往具有免疫抑制性的微環(huán)境，可以阻礙CAR-T細(xì)胞的遷移和浸潤。(3)很多惡性實(shí)體腫瘤還具有異質(zhì)性高的特點(diǎn)，單一靶點(diǎn)抗原往往不能達(dá)到最佳的治療效果，且有復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。因此，用于結(jié)直腸癌、卵巢癌、胰腺癌等惡性實(shí)體腫瘤患者的CAR-T細(xì)胞療法，需要更進(jìn)一步提高其作用效率和有效性。

綜上所述，本領(lǐng)域仍然需要進(jìn)一步的研究，針對惡性腫瘤(尤其是實(shí)體瘤) 開發(fā)一種能更高效、治療效果更好的工程化免疫細(xì)胞。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對惡性腫瘤(尤其是實(shí)體瘤) 提供一種能更高效、治療效果更好的工程化免疫細(xì)胞(如CAR-T細(xì)胞)。