[發(fā)明專利]聯(lián)合表達(dá)CCR2b和CD40L的工程化免疫細(xì)胞及其制備和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111322947.0
• 申請(qǐng)日: 2021-11-10
• 公開（公告）號(hào): CN113755448B
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張曦;黃智宏;韓德平;燕妮;王調(diào)霞;朱曉娜;王寧;林偉雄;盧永
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州百吉生物制藥有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;C12N15/62;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 上海一平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 徐迅;崔佳佳

1.一種工程化免疫細(xì)胞，其特征在于，所述工程化免疫細(xì)胞為T細(xì)胞或NK細(xì)胞，并且所述的免疫細(xì)胞具有以下特征：

(a) 所述免疫細(xì)胞表達(dá)嵌合抗原受體CAR，其中所述CAR靶向腫瘤細(xì)胞的表面標(biāo)志物，其中所述CAR的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括NKG2D的胞外結(jié)構(gòu)域；

(b) 所述的免疫細(xì)胞表達(dá)外源的CCR2b蛋白；和

(c) 所述的免疫細(xì)胞表達(dá)外源的人CD40L蛋白；

所述NKG2D的胞外結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第73-216位所示；

所述CCR2b蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；和

所述CD40L人蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。

2.如權(quán)利要求1所述的工程化免疫細(xì)胞，其特征在于，所述CAR的結(jié)構(gòu)如式I所示：

L-NKG2D-H-TM-C-CD3ζ (I)

式中，

L為無或信號(hào)肽序列；

NKG2D為NKG2D胞外結(jié)構(gòu)域；

H為無或鉸鏈區(qū)；

TM為跨膜結(jié)構(gòu)域；

C為共刺激信號(hào)結(jié)構(gòu)域；

CD3ζ為源于CD3ζ的胞漿信號(hào)傳導(dǎo)序列；

所述“-”為連接肽或肽鍵。

3.一種制備權(quán)利要求1所述的工程化免疫細(xì)胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(A) 提供待改造的免疫細(xì)胞；和

(B) 對(duì)所述的免疫細(xì)胞進(jìn)行改造，從而使得所述的免疫細(xì)胞表達(dá)所述的CAR分子以及外源的CCR2b蛋白和外源的CD40L蛋白，從而獲得權(quán)利要求1所述的工程化免疫細(xì)胞。

4.一種制劑，其特征在于，所述制劑含有權(quán)利要求1所述的工程化免疫細(xì)胞，以及藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。

5.一種如權(quán)利要求1所述的工程化免疫細(xì)胞的用途，其特征在于，用于制備治療癌癥的藥物。

6.如權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于，所述癌癥選自下組：結(jié)腸癌、直腸癌、卵巢癌或胰腺癌。

7.如權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于，所述癌癥為NKG2D配體高表達(dá)和/或趨化因子高表達(dá)和/或CD40高表達(dá)的癌癥。

8.一種用于制備權(quán)利要求1所述的工程化免疫細(xì)胞的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒含有容器，以及位于容器內(nèi)的：

(1) 第一核酸序列，所述第一核酸序列含有用于表達(dá)所述CAR的第一表達(dá)盒，其中所述CAR的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域?yàn)镹KG2D的胞外結(jié)構(gòu)域；

(2) 第二核酸序列，所述第二核酸序列含有用于聯(lián)合表達(dá)CCR2b的第二表達(dá)盒；和

(3) 第三核酸序列，所述第三核酸序列含有用于聯(lián)合表達(dá)CD40L的第三表達(dá)盒。