[發(fā)明專利]一種直接測(cè)定谷丙甘氨酸膠囊中3種氨基酸含量的方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202111322692.8 | 申請(qǐng)日： | 2021-11-09 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN114047265A | 公開(kāi)（公告）日： | 2022-02-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 任琦;陳希;肖小武;洪燕;姚閩;章紅;石青松 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 江西省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院 |
| 主分類號(hào)： | G01N30/02 | 分類號(hào)： | G01N30/02 |
| 代理公司： | 北京華科聯(lián)合專利事務(wù)所(普通合伙) 11130 | 代理人： | 王為 |
| 地址： | 330009 江*** | 國(guó)省代碼： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 直接 測(cè)定 甘氨酸 膠囊 氨基酸 含量 方法 | ||
本發(fā)明涉及一種直接測(cè)定谷丙甘氨酸膠囊中3種氨基酸含量的方法，所述方法包括供試品和對(duì)照品溶液制備和HPLC測(cè)定，其中，HPLC測(cè)定采用Sharpsil氨基柱(4.6mm×250mm，5μm)，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，以溶液A和乙腈為流動(dòng)相，其中溶液A為：20mmol/L磷酸二氫鉀溶液，本發(fā)明測(cè)定方法采用非常適合極性物質(zhì)分析的氨基色譜柱，采用本發(fā)明色譜條件3種氨基酸能完全分離，測(cè)定方法無(wú)需衍生化處理即可直接測(cè)定3種氨基酸，縮短了前處理步驟和時(shí)間，操作較衍生化法更簡(jiǎn)單，且具有良好的精密度、重復(fù)性和準(zhǔn)確度，可用于谷丙甘氨酸膠囊中3種氨基酸含量的測(cè)定。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種藥物制劑中有效成份的檢測(cè)方法，特別涉及一種直接測(cè)定谷丙甘氨酸膠囊中3種氨基酸含量的方法
背景技術(shù)
氨基酸含量檢測(cè)方法多采用分光光度法、近紅外光譜法、高效液相色譜法，其中分光光度法多用于單組份氨基酸或氨基酸總量的測(cè)定，且需要用茚三酮衍生化后再測(cè)定；近紅外光譜法具有高效、無(wú)污染、不破壞樣品以及同時(shí)檢測(cè)多組分的優(yōu)點(diǎn)，但存在準(zhǔn)確性差的缺點(diǎn)。高效液相色譜法可對(duì)多組分氨基酸樣品進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定方法分為柱前衍生法和柱后衍生法。一般采用異硫腈酸苯酯(PITC)、鄰苯二甲醛(OPA)、2,4-二硝基氟苯(DNFB)等衍生化試劑進(jìn)行柱前衍生，存在衍生反應(yīng)條件苛刻(PITC法)、衍生時(shí)間長(zhǎng)(DNFB法)、衍生物不穩(wěn)定(OPA法)等缺點(diǎn)；柱后衍生法測(cè)定氨基酸需先用陽(yáng)離子交換柱分離氨基酸，再與茚三酮或OPA柱后衍生成具有熒光或紫外吸收的物質(zhì)后測(cè)定分析，柱后衍生需要專門的氨基酸分析儀，價(jià)格偏貴。
谷丙甘氨酸膠囊為復(fù)方制劑，其組成成分為谷氨酸，丙氨酸和甘氨酸。主要用于前列腺增生引起的尿頻、排尿困難、尿潴留等癥的治療，谷丙甘氨酸膠囊標(biāo)準(zhǔn)收載于《中國(guó)藥典》2020年版二部，使用DNFB為衍生化試劑，柱前衍生后用HPLC法在360nm下測(cè)定氨基酸的含量。該方法氨基酸需在堿性條件下與DNFB在60℃水浴中反應(yīng)50min，衍生化時(shí)間較長(zhǎng)。氨基柱是由極性基團(tuán)氨丙硅烷基鍵合在硅膠上制成的極性鍵合色譜柱，主要用于分離極性大的物質(zhì)，如：糖類和氨基酸的分離，待測(cè)物質(zhì)主要因氫鍵及范德華力的強(qiáng)弱實(shí)現(xiàn)分離。本研究采用HPLC法，使用氨基柱在210nm波長(zhǎng)下直接測(cè)定谷丙甘氨酸膠囊中3種氨基酸的含量，避免衍生化法測(cè)定氨基酸的一些缺點(diǎn)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種直接測(cè)定谷丙甘氨酸膠囊中3種氨基酸含量的方法，所述方法，包括以下步驟：
1)對(duì)照品溶液的制備：稱取L-谷氨酸對(duì)照品、L-丙氨酸對(duì)照品和甘氨酸對(duì)照品，置同一量瓶中，加溶液A使溶解，再用乙腈稀釋至刻度，作為對(duì)照品儲(chǔ)備溶液；再經(jīng)流動(dòng)相稀釋，得到對(duì)照品溶液；
2)供試品溶液的制備：取谷丙甘氨酸膠囊內(nèi)容物，置量瓶中，加溶液A使溶解，再用乙腈稀釋至刻度；得到供試品溶液；
3)測(cè)定：將對(duì)照品溶液和供試品溶液注入高效液相色譜儀，得到色譜圖，根據(jù)色譜圖計(jì)算供試品溶液中谷氨酸，丙氨酸和甘氨酸的含量；
其中，所述高效液相色譜儀的色譜條件如下：
色譜柱為：Sharpsil氨基柱(4.6mm×250mm，5μm)；
流動(dòng)相：溶液A∶乙腈＝43-47∶53-57
其中，溶液A為18-22mmol/L磷酸二氫鉀溶液，配制方法如下：取磷酸二氫鉀2-3g，加水1L溶解后，加濃氨54-6mL，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.5-5.5
流速：0.8-1.2mL/min；
柱溫：35-45℃；
進(jìn)樣量：10-100μL；
檢測(cè)波長(zhǎng)：200-220nm。
優(yōu)選的，所述高效液相色譜儀的色譜條件如下：
色譜柱為：Sharpsil氨基柱(4.6mm×250mm，5μm)；
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