[發(fā)明專利]4’-N-demethyl-vicenistatin及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111322195.8
• 申請日: 2021-11-09
• 公開（公告）號: CN113912658B
• 公開（公告）日: 2023-08-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李青連;鞠建華;梁智鋮;李駿;凌春耀
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院南海海洋研究所;南方海洋科學(xué)與工程廣東省實(shí)驗(yàn)室（廣州）
• 主分類號: C07H17/02
• 分類號: C07H17/02;A61K31/7052;A61P35/00;A61P31/04;A61P31/10;A61P35/02;C12N15/76;C12N15/54;C12N1/21;C12R1/465
• 代理公司: 廣州科粵專利商標(biāo)代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星;朱聰聰

1.一種4’-N-demethyl-vicenistatin的制備方法，其特征在于，所述的4’-N-demethyl-vicenistatin是從Streptomyces?parvus?SCSIO?Mla-L010的N-甲基轉(zhuǎn)移酶失活突變株SCSIO?Mla-L010/ΔvicG中分離得到，所述Mla-L010/ΔvicG是將S.parvus?SCSIOMla-L010基因組的vicenistatin基因簇中N-甲基轉(zhuǎn)移酶基因vicG失活而獲得的，所述的vicG序列如SEQ?ID?NO.1所示；

所述的4’-N-demethyl-vicenistatin，其結(jié)構(gòu)如式(Ⅰ)：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)制備N-甲基轉(zhuǎn)移酶失活突變株SCSIO?Mla-L010/ΔvicG的發(fā)酵培養(yǎng)物，將發(fā)酵上清液和菌絲體離心分離，菌絲體用丙酮萃取，上清液用丁酮萃取，獲得丙酮萃取液和丁酮萃取液，然后通過減壓濃縮萃取液后得到菌絲體浸膏和上清液浸膏，將兩個浸膏混合得到粗浸膏；

(2)將步驟(1)得到的粗浸膏用硅膠拌樣并進(jìn)行正相硅膠柱層析，采用氯仿/甲醇體系按以下體積比進(jìn)行梯度洗脫：100:0；98:2；96:4；94:6；92:8；9:1；8:2；6:4；5:5；0:100，順序得到Fr.A1～10共10個組分；將組分氯仿/甲醇92:8；9:1；8:2；6:4洗脫的Fr.A5～8合并，通過HPLC純化，得到所述的4’-N-demethyl-vicenistatin。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述的通過HPLC純化，是以甲醇為流動相，采用Sephadex?LH-20羥丙基葡聚糖凝膠色譜柱進(jìn)行層析并收集目標(biāo)組分，利用半制備高效液相色譜和250×10mm,5μm的ODS色譜柱，按以下條件制備目標(biāo)峰：CH₃CN/H₂O，32:68，V/V，含0.1％醋酸體系等度洗脫25min，流速2.5mL/min，得到所述的4’-N-demethyl-vicenistatin，t_R＝14.1min。

4.N-甲基轉(zhuǎn)移酶失活突變株SCSIO?Mla-L010/ΔvicG在制備4’-N-demethyl-vicenistatin中的應(yīng)用，所述SCSIO?Mla-L010/ΔvicG是將S.parvus?SCSIO?Mla-L010基因組的vicenistatin基因簇中N-甲基轉(zhuǎn)移酶基因vicG失活而獲得的，所述的vicG序列如SEQID?NO.1所示；

所述的4’-N-demethyl-vicenistatin，其結(jié)構(gòu)如式(Ⅰ)：