[發明專利]甲胎蛋白抗體包被磁珠的方法、偶聯磁珠及試劑盒

在審

• 申請號: 202111320937.3
• 申請日: 2021-11-09
• 公開（公告）號: CN114034865A
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發明（設計）人: 楊美玲;梁曉丹;劉雄浪;閆承夫;夏皓男
• 申請（專利權）人: 石家莊斯巴克生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/68;G01N33/576;G01N33/543;G01N33/531
• 代理公司: 鄭州匯誠眾遠專利代理事務所(普通合伙) 41211
• 代理人: 栗星

本發明涉及甲胎蛋白抗體包被磁珠的方法、偶聯磁珠及試劑盒，是在甲胎蛋白抗體中加入預處理液進行預處理，之后將經過預處理的甲胎蛋白抗體與羧基磁珠偶聯，得到甲胎蛋白抗體偶聯磁珠，其中預處理液包括十二烷基硫酸鈉溶液。在甲胎蛋白抗體與羧基磁珠進行偶聯前，通過十二烷基硫酸鈉對甲胎蛋白抗體進行預處理，可以明顯提高甲胎蛋白抗體與磁珠的偶聯效率，提高現有技術中利用化學發光磁微粒免疫分析法檢測人血清中甲胎蛋白的靈敏度和信噪比。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及甲胎蛋白抗體包被磁珠的方法、偶聯磁珠及試劑盒。

背景技術

甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein，AFP)是一種屬于白蛋白家族的糖蛋白，主要由胎兒肝細胞及卵黃囊合成，其分子量為70000道爾頓。甲胎蛋白在胎兒血液循環中具有較高濃度，出生后則下降，出生后2-3月甲胎蛋白被白細胞替代，故在成人血清中含量極低，較難檢出。

AFP具有重要的生理功能，包括運輸功能、生長因子調節功能、T淋巴細胞誘導凋亡和免疫抑制等。AFP與慢性病毒性肝炎、肝硬化及多種腫瘤的發生發展密切相關，在多種腫瘤中均可表現出高濃度，可作為多種腫瘤的陽性檢測指標。目前臨床上主要用于原發性肝癌的輔助診斷，AFP也可與人體絨毛膜促性腺激素聯合檢測，用于非精原細胞型睪丸癌患者的病情監測。

檢測甲胎蛋白的常規方法是酶聯免疫吸附法，但該方法存在大量不足，例如操作繁瑣、檢測靈敏度低、檢測線性范圍窄和重現性差等。近年來，具有高靈敏度、檢測范圍寬和操作簡便等優點的化學發光免疫分析法，逐漸成為了最理想的檢測方法。如公開號為CN112763719A的專利申請中，公開了一種用核酸適配體磁珠檢測甲胎蛋白的方法，將甲胎蛋白核酸適配體與磁珠混合，之后分離磁珠進行檢測，雖然操作簡便，但甲胎蛋白抗體與磁珠的偶聯效率低，會造成檢測不靈敏，信噪比不足的問題。

發明內容

本發明的目的是提供一種甲胎蛋白抗體包被磁珠的方法、偶聯磁珠及試劑盒，利用十二烷基硫酸鈉對甲胎蛋白抗體進行預處理，從而改善甲胎蛋白抗體與磁珠的偶聯效率，最終提高現有技術中利用化學發光磁微粒免疫分析法檢測人血清中甲胎蛋白靈敏度和信噪比不足的技術問題。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：一種甲胎蛋白抗體包被磁珠的方法，在甲胎蛋白抗體中加入預處理液進行預處理，之后將經過預處理的甲胎蛋白抗體與羧基磁珠偶聯，得到甲胎蛋白抗體偶聯磁珠，其中預處理液包括十二烷基硫酸鈉溶液。

進一步優選，十二烷基硫酸鈉溶液的濃度為0.2～0.3％，預處理時間為5～10min，預處理溫度為20～25℃。

進一步優選，十二烷基硫酸鈉溶液的濃度為0.2％、預處理時間為10min，預處理溫度為25℃。

進一步優選，所述預處理液還包括濃度為10mM～80mM的MES緩沖液。

進一步優選，羧基磁珠在于甲胎蛋白抗體偶聯前，與1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽與N-羥基琥珀酰亞胺的混合液進行混合活化，其中1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽與N-羥基琥珀酰亞胺的濃度均為8～12mg/ml；活化溫度為23～28℃，活化時間為10～20min。

進一步優選，將經過活化的羧基磁珠在MES緩沖液中洗滌2～3次，其中MES緩沖液的濃度為10mM～80mM，pH為5.5～7.5，之后將經過預處理的甲胎蛋白抗體和經過洗滌的羧基磁珠進行混合偶聯的溫度為22～28℃，混合偶聯時間為1～5h。

進一步優選，將經過偶聯的磁珠放入含有0.1％BSA的MES緩沖液中封閉處理，其中密封時間為5～8h，密封溫度為22～28℃，之后將經過密封處理的偶聯磁珠加入到Tris緩沖液重懸保存，保存溫度為2～8℃。

進一步優選，所述甲胎蛋白抗體包被每毫克磁珠的量為10～30μg。