[發(fā)明專利]單個抗原特異性轉(zhuǎn)基因雜交瘤細(xì)胞篩選方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111306352.6
• 申請日: 2021-11-05
• 公開（公告）號: CN114134163A
• 公開（公告）日: 2022-03-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王戰(zhàn)輝;沈建忠;溫凱;余文博;于雪芝;江海洋;李園;李培培
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/85;C12N5/20;C07K16/00
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 黃爽

1.單個抗原特異性轉(zhuǎn)基因雜交瘤細(xì)胞篩選方法，其特征在于，所述方法包括：制備表達(dá)EGF-R-AVI-tag融合蛋白的轉(zhuǎn)基因Sp2/0骨髓瘤細(xì)胞，結(jié)合傳統(tǒng)雜交瘤技術(shù)的脾細(xì)胞融合技術(shù)，獲得可在細(xì)胞膜展示分泌型特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，并利用單細(xì)胞分選系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)對單個特異性轉(zhuǎn)基因雜交瘤細(xì)胞的篩選；

所述EGF-R-AVI-tag融合蛋白為：

(a)由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；

(b)SEQ ID NO:1所示序列經(jīng)取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸且具有同等功能的由(a)衍生的蛋白質(zhì)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，編碼EGF-R-AVI-tag融合蛋白的核酸序列通過質(zhì)粒導(dǎo)入Sp2/0骨髓瘤細(xì)胞，或通過基因工程手段整合到Sp2/0骨髓瘤細(xì)胞的基因組中。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，編碼EGF-R-AVI-tag融合蛋白的核酸序列通過PiggyBac轉(zhuǎn)座系統(tǒng)整合到Sp2/0骨髓瘤細(xì)胞的基因組中。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在與脾細(xì)胞融合之前，還包括以下步驟：對轉(zhuǎn)基因Sp2/0骨髓瘤細(xì)胞依次進(jìn)行體外生物素化和PE-鏈霉親和素標(biāo)記，然后通過FACS富集并制備單個PE-鏈霉親和素標(biāo)記的轉(zhuǎn)基因Sp2/0骨髓瘤細(xì)胞，用于后續(xù)細(xì)胞融合。

5.按照權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述方法篩選得到的單個特異性轉(zhuǎn)基因雜交瘤細(xì)胞。

6.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述方法或權(quán)利要求5所述轉(zhuǎn)基因雜交瘤細(xì)胞在單克隆抗體制備中的應(yīng)用。