[發明專利]一種敵百蟲半抗原及其制備方法、抗原、抗體及其應用

在審

• 申請號: 202111299579.2
• 申請日: 2021-11-04
• 公開（公告）號: CN113896743A
• 公開（公告）日: 2022-01-07
• 發明（設計）人: 楊星星;周佳;付輝;李澍才;李道霞;姚歡;余曉琴;王炳志;馬濤;楊國偉
• 申請（專利權）人: 深圳市易瑞生物技術股份有限公司;四川省食品檢驗研究院
• 主分類號: C07F9/40
• 分類號: C07F9/40;C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K16/44;G01N33/53;G01N33/548;G01N33/558;G01N33/577;G01N33/58
• 代理公司: 北京匯知杰知識產權代理有限公司 11587
• 代理人: 楊巍;柴春玲

本發明涉及藥物免疫檢測合成技術領域，具體公開了一種敵百蟲半抗原、敵百蟲半抗原中間體及其合成方法、基于該敵百蟲半抗原的敵百蟲抗原、特異性針對該敵百蟲抗原的敵百蟲抗體、其應用等。在將本發明的敵百蟲抗原和抗體應用于敵百蟲膠體金層析檢測裝置時，其靈敏度可達到100μg/kg。

技術領域

本發明涉及藥物免疫檢測合成技術領域，特別是涉及一種高純度敵百蟲半抗原及其合成方法、應用。

背景技術

敵百蟲是一種有機磷殺蟲劑，屬磷酸酯類，為白色晶狀粉末，其揮發性較低。1952年，敵百蟲由德國拜耳公司合成，在中國生產使用也有近50多年的歷史，其在農業上應用范圍很廣，主要用于防治菜青蟲、桑野蠶、象鼻蟲、果蠅等多種害蟲。但由于其毒性，2017年10月27日，敵百蟲被世界衛生組織國際癌癥研究機構列為3類致癌物，唐龍等人的研究表明敵百蟲對雄性動物具有生殖毒性。

敵百蟲的檢測分析可采用催化光度法、氣相色譜法、氣相色譜質譜法、液相色譜質譜法等等。

催化光度法需進行水浴加熱，顯色容易受到金屬離子的干擾；氣相色譜法需要轉換、萃取等多個環節，操作復雜且容易引入誤差；氣相色譜質譜法需要進行水樣前處理，將敵百蟲轉化成敵敵畏后測定，操作繁瑣，或者測定敵百蟲的分解產物，但可能導致測定結果的偏差和定性錯誤；范俊采用萃取后進樣的液相色譜質譜法，耗時較長且萃取和凈化所用的試劑污染環境。色譜法的靈敏度較其它方法較高，這些方法能以較高的精度解決部分實際問題。但通常情況下，這些理化分析方法的樣本前處理過程相當復雜，所需的儀器也較昂貴，效率比較低下，分析成本較高，對待測物的理化性質的限制嚴格。這些方法對出現動物可食組織中的敵百蟲殘留問題不能做出迅速反應，也不適合作為敵百蟲在可食動物組織中殘留的初篩方法。

針對目前我國對食品安全要求越來越嚴格的趨勢，建立靈敏度高、特異性強、簡便易行的動物源性食品中敵百蟲殘留量的測定方法，為加強食品的貿易進出口把關意義重大。免疫檢測法彌補了理化檢測方法的缺憾，它最突出的優點是取樣量少、前處理簡單、容量大、儀器化程度低、靈敏度高，分析效率可達色譜分析方法的幾十倍，適用于大批量樣本敵百蟲殘留的快速篩選性檢測。它可以同時測定大批量樣品，用于大批量檢測的初篩；投資少而且操作簡便，適合基層監督部門使用。

在建立免疫學檢測方法并應用該檢測方法檢測敵百蟲殘留量時，關鍵技術在于能夠獲取到特異性強、靈敏度高的抗體，而要實現這一目標，前提條件是制備出合適的敵百蟲半抗原。然而，在這方面，相關的報道非常有限。因此，亟需進一步探索敵百蟲半抗原的新的合成方法以及由此得到的新敵百蟲半抗原，從而助力敵百蟲殘留的大批量快速篩選。

發明內容

為了克服現有技術中的上述缺陷，本發明人針對敵百蟲的結構特點開發出了一種敵百蟲半抗原的合成方法，并由此獲得了一種新的敵百蟲半抗原、抗原及其抗體。利用該敵百蟲半抗原、抗原及其抗體，可以通過免疫檢測的方式來對樣品中的敵百蟲進行有效檢測。

因此，在本發明的第一方面，提供了一種敵百蟲半抗原，其結構式如式(I)所示：

其中，所述R₁選自C₀-C₆亞烷基；R₂選自C₁-C₆亞烷基。

在本發明的第二方面，提供了一種用于制造本發明第一方面的敵百蟲半抗原的中間體，其結構式如式(II)所示：

其中，R₁選自C₀-C₆亞烷基。

在本發明的第三方面，提供了一種制備本發明第一方面的敵百蟲半抗原的方法，所述方法包括以下步驟：

步驟1：在低溫下，使三氯化磷與結構式如的化合物1反應，經減壓蒸餾后得到中間體1：