[發(fā)明專利]一種鏈球菌溶血素O融合蛋白

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111298177.0
• 申請(qǐng)日: 2021-11-04
• 公開（公告）號(hào): CN113880957A
• 公開（公告）日: 2022-01-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳昕陽;付理文;劉艷慧;劉容
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海捷門生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;A61K38/16;A61K47/64;A61K47/65;A61K39/09;A61K39/385;A61P31/04;C12R1/19
• 代理公司: 上海上谷知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31342
• 代理人: 蔡繼清

本發(fā)明涉及一種鏈球菌溶血素O融合蛋白。具體地，本發(fā)明提供一種鏈球菌溶血素O融合蛋白，所述的融合蛋白包含鏈球菌溶血素O、His標(biāo)簽蛋白；和Trx標(biāo)簽蛋白。本發(fā)明所述的融合蛋白具有高表達(dá)、鎳柱親和層析低成本分離或純化、純化后的蛋白穩(wěn)定性強(qiáng)和具有優(yōu)異的鏈球菌溶血素O抗原優(yōu)勢(shì)，從而有利于鏈球菌溶血素O的檢測(cè)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體地涉一種鏈球菌溶血素O融合蛋白。

背景技術(shù)

化膿鏈球菌是一種可以引起皮膚、皮下組織的化膿性炎癥、呼吸道感染、流行性咽炎的爆發(fā)性流行以及新生兒敗血癥、細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、猩紅熱和風(fēng)濕熱、腎小球腎炎等變態(tài)反應(yīng)的細(xì)菌，其鏈球菌溶血素O(Streptolysin O,SLO)能夠結(jié)合人及其它動(dòng)物的細(xì)胞膜上的膽固醇，從而形成環(huán)狀寡聚體，進(jìn)而出現(xiàn)大的孔道，引起細(xì)胞膜的溶解。SLO蛋白具有較強(qiáng)的抗原性，并且能夠在體內(nèi)殘留，從而刺激人體產(chǎn)生抗體(ASO)，ASO集聚，導(dǎo)致變態(tài)反應(yīng)。

由于SLO蛋白抗原性較強(qiáng)，因此可以作為一種檢測(cè)試劑檢驗(yàn)患者體內(nèi)的ASO含量。目前SLO蛋白的制備方法主要是通過基因工程技術(shù)構(gòu)建重組質(zhì)粒，進(jìn)而轉(zhuǎn)入宿主菌后表達(dá)純化的方法。然而，目前基因工程重組表達(dá)的SLO蛋白主要存在多種缺陷問題，例如His-SLO蛋白得率較低(低表達(dá)量)，GST-SLO蛋白純化成本較高，且蛋白不穩(wěn)定等等。例如，現(xiàn)有技術(shù)中擴(kuò)增的SLO片段被連接在載體pET-28a或者pMD18T中構(gòu)建重組質(zhì)粒，然而重組質(zhì)粒pET-28a-SLO可溶性蛋白表達(dá)量較低(多為包涵體)，而pMD-18T-SLO所表達(dá)的帶有GST標(biāo)簽的蛋白，不僅GST親和柱純化成本較高，而且GST-SLO蛋白穩(wěn)定性較差，反復(fù)凍融1～2次或較長時(shí)間4℃放置會(huì)有大量絮狀沉淀析出，更難以通過37℃穩(wěn)定性考驗(yàn)等等。

因此，本領(lǐng)域需要開發(fā)一種高表達(dá)、低成本分離或純化、穩(wěn)定性強(qiáng)和具有優(yōu)異抗原活性的SLO蛋白融合蛋白。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于開發(fā)一種高表達(dá)、低成本分離或純化、穩(wěn)定性強(qiáng)和具有優(yōu)異抗原活性的SLO蛋白融合蛋白。

本發(fā)明第一方面，提供一種鏈球菌溶血素O融合蛋白，所述的融合蛋白包含：

鏈球菌溶血素O；

His標(biāo)簽蛋白；和

Trx標(biāo)簽蛋白。

在另一優(yōu)選例中，所述的鏈球菌溶血素O融合蛋白為分離的鏈球菌溶血素O融合蛋白。

在另一優(yōu)選例中，所述的鏈球菌溶血素O包括人源鏈球菌溶血素O。

在另一優(yōu)選例中，所述鏈球菌溶血素O的核苷酸序列具有SEQ ID NO:5所示。

在另一優(yōu)選例中，所述鏈球菌溶血素O的核苷酸序列與SEQ ID NO:5所示的序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的同一性。

在另一優(yōu)選例中，所述鏈球菌溶血素O的核苷酸序列與SEQ ID NO:5所示核苷酸序列互補(bǔ)。

在另一優(yōu)選例中，所述的鏈球菌溶血素O的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所述。

在另一優(yōu)選例中，所述的His標(biāo)簽蛋白的核苷酸序列具有SEQ ID NO:6所示核苷酸序列。

在另一優(yōu)選例中，所述的His標(biāo)簽蛋白的核苷酸序列與SEQ ID NO:6所示的序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的同一性。

在另一優(yōu)選例中，所述的His標(biāo)簽蛋白的核苷酸序列與SEQ ID NO:6所示核苷酸序列互補(bǔ)。

在另一優(yōu)選例中，所述的His標(biāo)簽蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。