[發明專利]基于DNA載體和復制型痘苗病毒載體的新冠病毒復合型疫苗

在審

• 申請號: 202111289741.2
• 申請日: 2021-11-02
• 公開（公告）號: CN114032217A
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發明（設計）人: 邵一鳴;王書暉;郝彥玲;劉穎;李丹;任莉;馮毅
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心性病艾滋病預防控制中心
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/50;A61K39/215;A61P31/14
• 代理公司: 北京市眾天律師事務所 11478
• 代理人: 李新軍

本發明提供了一種同時表達新冠病毒S基因的胞外區段和N基因全長區段的重組痘苗病毒，本發明還提供了含有所述重組痘苗病毒，以及表達新冠病毒的S基因的胞外區段的DNA載體和表達新冠病毒N基因全長區段的DNA載體的免疫接種試劑盒作為復合型疫苗的應用。通過使用本發明提供的復合型疫苗中的三種疫苗在0、2、4周的順序接種可以誘導實驗動物產生針對新冠病毒N，S1，S2蛋白特異的CD4，CD8細胞反應，且CD8T細胞反應高于CD4T細胞反應，誘導的T細胞免疫可持續至少3個月，結合抗體持續至6個月未見明顯下降，表明復合疫苗可以誘導針對SARS?CoV?2持久的免疫應答，該疫苗誘導的中和抗體具有交叉反應活性，可在一定程度上預防新冠病毒多種變異株的感染。

技術領域

本發明涉及醫學生物技術領域，具體涉及DNA-痘苗病毒載體復合型新冠疫苗，其能夠誘導高水平的抗新型冠狀病毒的體液和細胞免疫應答，預防新型冠狀病毒感染。

背景技術

新冠肺炎的病原體是新型冠狀病毒-2(SARS-CoV-2)，在本發明中也被簡稱為新冠病毒。SARS-CoV-2屬于冠狀病毒科的β-冠狀病毒屬，是一類有囊膜的單股正鏈RNA病毒，具有較高的突變率，其基因組長度約為30kb。基因組的前2/3是非結構基因ORF1a/b，主要編碼與病毒復制相關的酶(RNA依賴的 RNA聚合酶，RdRp)，后1/3依次編碼四種結構蛋白：刺突蛋白(S)，包膜蛋白(E)，膜蛋白(M)和核衣殼蛋白(N)。自2021年1月首次發現B.1.1.7(alpha)變異株后，全球相繼報道了B.1.351(beta)，P.1(gamma)以及B.1.617.2(Delta) 等變異株。變異株的突變位點大多集中在刺突蛋白的受體結合區、剪切位點等，突變提高了病毒的復制能力，與受體結合的親合力，從而增強了病毒的感染力，最終降低了現有COVID-19疫苗的保護效果。

冠狀病毒表面刺突蛋白(spike protein,S蛋白)是決定病毒嗜性和進入宿主細胞的關鍵蛋白，由S1和S2兩個亞基組成。S1亞基的RBD(receptor-binding domain，受體結合域)與受體ACE2蛋白結合，S2介導病毒包膜與細胞膜的融合。現有已上市COVID-19疫苗，包括滅活疫苗、亞單位疫苗、mRNA疫苗以及腺病毒疫苗，除滅活疫苗包含多種病毒抗原外，其他疫苗均僅包含S 蛋白或S基因。迄今發現的SARS-COV-2的S基因突變，已使現有疫苗的保護效果大打折扣。因此，要誘導更強大的免疫應答，疫苗需包含除S蛋白外更多的結構蛋白。

在SARS-CoV-2的自然感染過程中，先前的感染只能減輕NHP和雪貂的臨床癥狀，不能預防再次感染。大多數人感染SARS-CoV-2后，體內出現的抗體在半年后逐漸消減，而T細胞反應存在時間相對較長。有研究表明，SARS 感染者的T細胞反應可持續17年之久。由于新冠病毒特異的中和抗體持續存在時間可能較短，誘導持久的T細胞免疫反應才是廣譜有效疫苗的關鍵所在。

N蛋白(nucleocapsidprotein)是冠狀病毒的核衣殼蛋白，不僅能誘導特異的抗體,還能誘導特異的細胞毒T細胞活性。核衣殼蛋白(N)在小鼠和家兔有很強的免疫原性，誘導的T細胞免疫與動物來源冠狀病毒有交叉反應性。SARS 感染者體內的N特異性T細胞與SARS-CoV-2的N蛋白有交叉反應也進一步支持了這一觀點。因此，N基因可誘導持久且具有交叉反應活性的細胞免疫，可作為復合新冠疫苗的重要抗原。

鑒于現有技術新冠病毒疫苗還存在著免疫保護持續時間短，保護力度低，以及缺乏對變異毒株的廣譜保護，本發明的目的在于提供針對新冠病毒感染的基于DNA載體和復制型痘苗病毒載體的新冠病毒復合型疫苗，以解決現有技術存在的問題。

發明內容