[發(fā)明專利]基于DNA載體和復制型痘苗病毒載體的新冠病毒復合型疫苗

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• 申請日: 2021-11-02
• 公開（公告）號: CN114032217A
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 邵一鳴;王書暉;郝彥玲;劉穎;李丹;任莉;馮毅
• 申請（專利權(quán)）人: 中國疾病預防控制中心性病艾滋病預防控制中心
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/50;A61K39/215;A61P31/14
• 代理公司: 北京市眾天律師事務所 11478
• 代理人: 李新軍

1.一種同時表達新冠病毒的S基因的胞外區(qū)段和N基因全長區(qū)段的重組痘苗病毒，其特征在于，所述重組痘苗病毒是在痘苗病毒天壇株基因組中胸腺苷激酶編碼區(qū)的位置整合入所述新冠病毒S基因的胞外區(qū)段和N基因全長區(qū)段，其中，所述S基因的胞外區(qū)段和N基因全長區(qū)段以5’端相對的方式連接，并分別連接在不同的啟動子下游，所述痘苗病毒天壇株保藏號為CCTCC：V200416。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組痘苗病毒，其特征在于，所述S基因的胞外區(qū)段位于痘苗病毒啟動子pE/L的下游，所述N基因全長區(qū)段位于痘苗病毒啟動子p7.5的下游。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的重組痘苗病毒，其特征在于，所述S基因的胞外區(qū)段、啟動子pE/L、N基因全長區(qū)段和啟動子p7.5以串聯(lián)形式連接，所述串聯(lián)后的序列如SEQ ID NO.3所示。

4.一種同時表達新冠病毒的S基因的區(qū)段和N基因全長區(qū)段的重組痘苗病毒，其特征在于，所述重組痘苗病毒的保藏號為CGMCC 21955，保藏日期為2021年09月28日，保藏分類命名為VTT-2019nCoV-SN，保藏單位為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。

5.權(quán)利要求1-4任一所述的重組痘苗病毒在制備新冠病毒疫苗中的應用。

6.一種含有權(quán)利要求1-4任一所述的重組痘苗病毒的免疫接種試劑盒，其特征在于，所述免疫接種試劑盒還含有表達新冠病毒的S基因的胞外區(qū)段的DNA載體，以及表達新冠病毒N基因全長區(qū)段的DNA載體。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的免疫接種試劑盒，其特征在于，所述表達新冠病毒N基因全長區(qū)段的DNA載體中的N基因全長區(qū)段的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述表達新冠病毒的S基因的胞外區(qū)段的DNA載體中的S基因的胞外區(qū)段的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的免疫接種試劑盒，其特征在于，所述表達新冠病毒N基因全長區(qū)段的DNA載體含有可轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生具有免疫激活功能的ssRNA的序列如SEQ ID NO.4所示的DNA。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的免疫接種試劑盒，其特征在于，所述表達新冠病毒的S基因的胞外區(qū)段的DNA載體，以及表達新冠病毒N基因全長區(qū)段的DNA載體被制備為注射劑，所述重組痘苗病毒被制備為注射劑或滴鼻劑。

10.一種制備權(quán)利要求1-4任一所述的重組痘苗病毒的方法，其特征在于，所述方法包括將新冠病毒S基因的胞外區(qū)段和N基因全長區(qū)段以同源重組的方式整合于痘苗病毒基因組中的步驟，在所述同源重組中，以攜帶有痘苗病毒同源重組序列tkL和tkR的穿梭質(zhì)粒作為新冠病毒S基因的胞外區(qū)段和N基因全長區(qū)段的DNA載體，所述穿梭質(zhì)粒攜帶有篩選標記neo基因和gfp基因，以及tkR的重復序列。

11.一種用于制備權(quán)利要求7所述免疫接種試劑盒中表達新冠病毒N基因全長區(qū)段的DNA載體中的N基因全長區(qū)段的多核苷酸分子，其特征在于，多核苷酸分子的序列如SEQ IDNO.1所示。

12.一種用于制備權(quán)利要求7所述免疫接種試劑盒中表達新冠病毒S基因的胞外區(qū)段的DNA載體中的S基因的胞外區(qū)段的多核苷酸分子，其特征在于，多核苷酸分子的序列如SEQID NO.2所示。

13.一種用于制備權(quán)利要求3所述的被整合入重組痘苗病毒天壇株基因組中的編碼新冠病毒的S基因的胞外區(qū)段和N基因全長區(qū)段的多核苷酸分子，其特征在于，所述多核苷酸分子的序列如SEQ ID NO.3所示。