[發明專利]一種胡蘆巴葉提取物檢測方法

在審

• 申請號: 202111283377.9
• 申請日: 2021-11-01
• 公開（公告）號: CN114088828A
• 公開（公告）日: 2022-02-25
• 發明（設計）人: 何彥峰;王洪倫;胡娜;林鵬程;王瑞楠
• 申請（專利權）人: 青海民族大學;中國科學院西北高原生物研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72
• 代理公司: 成都華風專利事務所(普通合伙) 51223
• 代理人: 杜朗宇

本發明提供一種胡蘆巴葉提取物的檢測方法，將胡蘆巴葉通過超聲醇提、溶劑萃取法得到胡蘆巴葉提取物。本發明將高效液相色譜與DAD檢測器及四極桿飛行時間串聯質譜聯用，對胡蘆巴中的黃酮提取物進行了表征。本發明能夠實現8種成分的有效分離，建立了標準可靠的檢測方法，為胡蘆巴葉提取物的開發和進一步研究提供了參考。

技術領域

本發明涉及中藥檢測領域，具體涉及一種胡蘆巴葉提取物檢測方法。

背景技術

胡蘆巴(Trigonella foenum-graecum L.)為豆科胡蘆巴屬一年生草本植物。胡蘆巴屬藥食同源之品，其干燥成熟的種子作為常用中藥收入《中華人民共和國藥典》。目前已從胡蘆巴中分離和研究了多種有效成分，主要包括生物堿、皂苷和黃酮類化合物，這些成分已被證實其潛在的藥用價值。除了其已知的藥用價值，如胃興奮劑、抗糖尿病和半乳糖(乳糖誘導)效應外，有研究還表明其具有降低膽固醇血癥、抗脂血癥、抗氧化劑、護肝、抗炎、抗菌、抗真菌、抗潰瘍、抗結石、抗癌藥和其他雜酚的藥物作用。這些研究大多使用了胡蘆巴種子粉末或不同形式的提取物，而對其葉子提取物研究的很少。

李建峰等(食品研究與開發,2020,v.41；No.394(21):162-168)以葫蘆巴葉為研究對象，采用同時蒸餾萃取法，配合氣相色譜-質譜技術(gas chromatography-massspectrometer，GC-MS)系統分析葫蘆巴葉中揮發性成分并研究其抗氧化活性，但并未對胡蘆巴葉中的其他有效成分作進一步研究，因此對胡蘆巴葉中含有的其他組分進行分析及研究很有必要，有利于胡蘆巴葉產品的進一步開發與利用。

發明內容

為了彌補上述現有技術方案的不足，本發明提供一種胡蘆巴葉提取物中黃酮類化合物的分離檢測方法。

本發明的技術方案為：

將胡蘆巴葉陰干、粉碎，經乙醇超聲提取，減壓濃縮，得到胡蘆巴葉醇提物浸膏。將醇提物浸膏加水混懸，依次用石油醚和乙酸乙酯各萃取，將水萃取組分經減壓濃縮、冷凍干燥，得胡蘆巴葉提取物。

在本發明的具體實施方式中胡蘆巴葉提取物通過以下方式得到：將胡蘆巴葉陰干、粉碎，經95％乙醇超聲提取，提取條件為：料液比1:10(g/mL)，提取5次，每次1h，提取溫度60℃，超聲頻率40kHz。提取后合并上清液，減壓濃縮，得到胡蘆巴葉醇提物浸膏。將醇提物浸膏加水混懸，依次用2倍體積石油醚和乙酸乙酯各萃取5次，將水萃取組分經減壓濃縮、冷凍干燥，得胡蘆巴葉提取物。

進一步地，將上述提取物與甲醇混合，后經離心，取其上清液，得到供試品溶液。

在本發明的技術方案中，采用高效液相色譜法對胡蘆巴葉提取物中的相關物質進行分離檢測，其中檢測器可以為紫外檢測器、質譜檢測器、核磁檢測器、熒光檢測器等常規用于表征檢測物質結構的檢測器。

在本發明的具體實施方案中，高效液相色譜的色譜條件為液相條件：流動相A：甲酸水溶液，流動相B：甲酸乙腈；色譜柱：C18；梯度洗脫程序如下：

其中，流動相A甲酸水溶液中甲酸的濃度為0.05％～0.5％，優選0.1％，流動相B甲酸乙腈溶液中甲酸的濃度為0.05％～0.5％，優選0.1％。

上述的梯度洗脫程序及流動相配比，能夠更好地分離雜質，有利于胡蘆巴葉提取物中相關物質的檢出，是檢測結果的準確度及精密度更高。

進一步地，在本發明的技術方案中高效液相色譜的流速為：0.1～0.5mL·min^-1，進樣量為3μL，柱溫為：40～60℃。

其中，流速優選0.3mL.min^-1,柱溫優選50℃。

上述優選色譜條件有利于進一步提高對胡蘆巴葉提取物中相關物質的檢測靈敏度。