[發明專利]一種凋亡微囊泡及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202111282900.6
• 申請日: 2021-11-01
• 公開（公告）號: CN113943705B
• 公開（公告）日: 2023-09-19
• 發明（設計）人: 周永勝;張曉;劉云松;朱原
• 申請（專利權）人: 北京大學口腔醫學院
• 主分類號: C12N5/0786
• 分類號: C12N5/0786;A61L27/38;A61L27/50
• 代理公司: 北京知匯林知識產權代理事務所(普通合伙) 11794
• 代理人: 董濤

1.一種凋亡微囊泡的制備方法，其特征在于，包括：

1）體外培養小鼠單核巨噬細胞白血病細胞系；

2）細胞匯合度達到90-100%時，加入星形孢菌素誘導細胞凋亡；

3）收集培養液上清液，然后通過梯度離心法分離即得到凋亡微囊泡;

步驟1）中所述小鼠單核巨噬細胞白血病細胞系為RAW264.7；

體外培養的培養基為：?含有10%FBS和1%青-鏈霉素雙抗的DMEM培養基;

所述星形孢菌素（STS）添加量為500nM。

2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述梯度離心法是通過包括下述步驟的方法實現的：

a)將所述培養液上清液于4℃，以800g離心10min，取上清液，獲得第一離心上清液；

b）將所述第一離心上清液于4℃、以2000g離心10min，取上清液，獲得第二離心上清液；

c）將所述第二離心上清液于4℃、以16000g離心30min，取沉淀物，即得粗制凋亡微囊泡。

3.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，還包括：

d）將所述粗制凋亡微囊泡以無菌PBS洗滌，然后于4℃、以16000g離心30min，獲得凋亡微囊泡純品。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的制備方法制備得到的凋亡微囊泡，所述凋亡微囊泡呈雙面凹的圓盤狀，粒徑為150-600nm，所述凋亡微囊泡平均粒徑240nm。

5.如權利要求4所述的凋亡微囊泡在制備用于促進間充質干細胞成脂向分化的制劑中的應用。

6.一種用于促進間充質干細胞成脂向分化的制劑，其特征在于，包含如權利要求4所述的凋亡微囊泡。

7.如權利要求6所述制劑，其特征在于，還包含間充質干細胞。

8.如權利要求6所述制劑，其特征在于，凋亡微囊泡的濃度為2μg/mL。