[發明專利]抗-Rho GTPase的構象單域抗體及其用途

有效

• 申請號: 202111282155.5
• 申請日: 2016-02-02
• 公開（公告）號: CN114133450B
• 公開（公告）日: 2023-09-22
• 發明（設計）人: 奧雷利安·奧利雄;勞拉·凱勒;吉勒斯·法夫爾;尼古拉斯·貝里;帕特里克·希納斯特拉
• 申請（專利權）人: 國家健康與醫學研究院;圖盧茲第三大學;克勞迪斯雷加德研究院
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;C12N15/13;A61K39/395;A61P35/00;G01N33/573
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 孟凡宏;袁森

本發明涉及活性形式的特異性抗?Rho?GTPase的構象單域抗體及其用途，尤其是在治療和診斷領域的用途。具體地，本發明涉及其中CDR1?IMGT、CDR2?IMGT和CDR3?IMGT的氨基酸序列與表B定義的H12、B6、4P75、4SP1、4SNP36、4SNP61、5SP10、5SP11、5SP58、5SNP47、5SNP48、5SNP65、B20、B15、B5、B71、E3、A6、G12、NB61、212B、111B或404F(hs2dAb)單域抗體的CDR1?IMGT、CDR2?IMGT和CDR3?IMGT的氨基酸序列具有至少90％一致性的單域抗體。

本申請是申請日為2016年2月2日、申請號為“201680007071.1”、發明名稱為“抗-Rho?GTPase的構象單域抗體及其用途”的發明專利申請的分案申請。

技術領域

本發明涉及抗-Rho?GTPase的構象單域抗體及其用途，尤其是在治療和診斷領域的用途。

背景技術

Rho?GTPase屬于與Ras同源的20個小GAPase家族，其大部分被認為是無成藥性的蛋白。它們的生理活性更多地在于開關I和開關II高度保守結構域的構象變化，而不是其鳥嘌呤核苷酸三磷酸水解酶非常緩慢的催化活性。因此，小G蛋白是在非活性GDP結合狀態和活性GTP結合構象之間循環的分子開關。Rho亞家族包括具有超過85％序列一致性的RhoA、RhoB和RhoC，其是參與廣泛的主要細胞過程，包括控制肌動球蛋白細胞骨架、細胞粘附、細胞分裂、細胞遷移、應激反應以及細胞存活或細胞凋亡的多效蛋白。這些GTPase通過添加對其錨定至細胞膜所必需的羧基末端類異戊二烯基進行翻譯后修飾，且在細胞膜上其可以通過鳥嘌呤核苷酸交換因子(GEF)催化的核苷酸交換在各種刺激下被活化。然后，活化步驟通過由GTPase激活蛋白(GAP)增強的GTP水解進行平衡。因此，活化的Rho細胞池在細胞膜保持為有限的池。主要部分從膜中排出，并通過鳥嘌呤核苷酸解離抑制劑(GDI)隔離在細胞質中。這些大蛋白質通過其氨基末端部分與Rho的開關結構域相互作用，從而防止GDP的釋放，并且它們的羧基末端部分也與異戊二烯基相互作用，屏蔽該疏水部分以便從細胞膜排出時保持Rho蛋白可溶。

這些調控因子一起將細胞中的絕大部分Rho蛋白(通常多達95％)維持為非活性，以便快速活化將與效應子蛋白相互作用的非常小的群體以啟動細胞轉導通路。此外，研究3種GDI與所有相互作用的Rho之間的串擾顯示，單個Rho的過表達可人為誘導其他Rho的置換和降解，并削弱不直接受轉基因控制的信號通路。這個關鍵點突顯出以選擇性的方式靶向單個Rho的復雜性。

獨特的RhoB似乎涉及與其最近的同源物RhoA和RhoC不同的細胞功能和調控。RhoB可以被棕櫚酰化和法呢基化或香葉基香葉基化、異戊烯基化，其分別定義質膜或內涵體的定位。使用常規的分子工具例如過表達野生型或突變體或通過RAN干擾遺傳敲低已經表征了在胞內運輸和粘附中發揮功能的一些主要的RhoB。其他功能與RhoB基因表達相關，作為對細胞因子或生長因子以及DNA損傷劑或輻射的即時早期應答。此外，RhoB在癌癥進展中起似是而非的(paradoxal)作用。RhoB可以改變腫瘤的形成，并常常在頭頸癌或肺癌中下調。